荔枝核提取物体外抗肿瘤生物活性及其机理的初步研究.pdfVIP

荔枝核提取物体外抗肿瘤生物活性及其机理的初步研究 摘 要 目的：观察荔枝核提取物体外抗肿瘤活性及诱导人肝癌细胞 HepG-2 及人神经母细胞瘤细 胞 SH-SY5Y 细胞凋亡的作用及凋亡过程中 caspase-3、caspase-8、caspase-9 及 Fas 的活性 变化，探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的可能机制。 方法：MTT 法观察荔枝核不同提取物体外对肿瘤细胞株增殖的影响，选取活性最好的组分 L2.3 检测它对 HepG-2 及 SH-SY5Y 增殖抑制活性的时效关系并进行 Hoechst 33258 染色， 观察它对两种肿瘤细胞的致凋亡能力；细胞凋亡率及细胞周期的改变采用 PI 染色和流式细 胞术进行测定；应用 caspase 活性检测试剂盒观察 L2.3 对 caspase-3、caspase-8、caspase-9 活性的影响；流式细胞仪检测 Fas 蛋白表达的变化。 结果：(1) 体外抑瘤实验结果：荔枝核提取物的多个组分都显示出对肿瘤细胞株的增殖抑 制活性，13 种组分中 L2.3 组分效果最好，对 6 种肿瘤细胞株(分别为：A375 细胞、A549 细胞、HEp-2 细胞、Hela 细胞、HepG-2 细胞及 SH-SY5Y 细胞)均有不同程度的增殖抑制 作用，尤其对 Hela 细胞、HepG-2 细胞及 SH-SY5Y 细胞的抑制作用较强，且呈剂量、时间 双重依赖性的特点(P0.05)。L2.3 在高剂量时对正常非洲绿猴肾细胞 Vero 有一定的毒性作 用。(2) 对细胞凋亡的影响：倒置显微镜下可见经 L2.3 处理 72 h 后几种肿瘤细胞明显变小 变圆，细胞存活数随药物浓度增加而减少。Hoechst 33258 染色后见处理组 HepG-2、SH- SY5Y 细胞核固缩并出现呈致密浓染蓝白色颗粒状荧光的凋亡小体。在 100、50 μg/mL 浓 度时，L2.3 处理 48 h 后 HepG-2 及 SH-SY5Y 细胞凋亡率显著增高(P0.05)，G /G 期细胞 0 1 减少(P0.05)，S 期细胞增多(P0.01)，G /M 期细胞减少。100 μg/mL L2.3 处理细胞后， 2 caspase-3、caspase-8、caspase-9 的活性呈时间依赖性增高(P0.01)，且有一定时间顺序。L2.3 作用于 HepG-2 细胞 48 h 后对 Fas 蛋白表达的影响在高剂量时较明显(P0.05)，而对于 SH- SY5Y 细胞 Fas 蛋白的表达呈明显的剂量依赖性增高(P0.05)。 结论：(1) 荔枝核提取物组分 L2.3 对体外培养的多种肿瘤细胞和正常非洲绿猴肾细胞具有 不同程度的增殖抑制作用，其中对人肝癌细胞 HepG-2 及人神经母细胞瘤细胞 SH-SY5Y 的 抑制作用最强，这种抑制作用呈一定的剂量和时间依赖性。(2) 荔枝核提取物组分 L2.3 可 I 通过诱导细胞凋亡，影响细胞周期分布，抑制 HepG-2、SH-SY5Y 细胞增殖。caspase-3、 caspase-8、caspase-9 的激活及 Fas 表达上调可能参与了 L2.3 诱导 HepG-2、SH-SY5Y 细胞 凋亡的通路。 关键词：荔枝核提取物；抗肿瘤；HepG-2 细胞；SH-SY5Y 细胞；细胞凋亡；caspase；Fas II The PrimaryStudyof theAnti-tumor Effect and Mechanism of The PrimaryStudyof theAnti-tumor Effect and Mechanism of TThhee PPrriimmaarryySSttuuddyyoofftthheeAAnnttii--ttuummoorr EEffffeeccttaanndd MMeecchhaanniissmm ooff Litc