清开灵注射液对小鼠免疫功能的影响及其体外 抑制HIV-1作用研究.pdfVIP

中英文摘要 清开灵注射液对小鼠免疫功能的影响及其体外 HIV-1 抑制HHIIVV--11 作用研究 硕士研究生：赵令斋 专业：免疫学 导师：曾耀英 研究员 中文摘要 第一章 清开灵注射液对小鼠免疫功能影响的体外研究 目的： 体外研究清开灵注射液(Solution of qingka iling, QKL)对小鼠T细胞活化、增 殖、细胞周期，对腹腔巨噬细胞(Mφ)吞噬功能和一氧化氮(NO)的产生及对胸腺细胞凋亡 的影响，探讨其对小鼠免疫功能的作用及机制。 方法：利用荧光标记的单克隆抗体染色结合流式细胞术，检测T细胞早期活化抗原 CD69的表达情况，分析QKL对未加刺激剂和刀豆蛋白A(Con A)刺激的T细胞早期活化的 影响；用MTT、WST-1和羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯(CFDA-SE)染色结合流式细胞 术检测QKL对未加刺激剂和Con A刺激的T细胞增殖的影响；碘化丙锭（PI）染色结合流 式细胞术分析QKL对未加刺激剂和Con A刺激的T细胞周期分布的影响；CFDA-SE标记 的大肠杆菌(E.Coli)结合流式细胞术检测QKL对小鼠腹腔Mφ吞噬功能的影响；Griess 反 应试剂盒检测QKL对脂多糖(LPS)激活的Mφ产生NO的影响；PI染色结合流式细胞术检测 QKL对小鼠胸腺细胞自发凋亡和地塞米松(DEX)诱导的细胞凋亡的影响。 结果：QKL对未加刺激剂的T细胞的早期活化、增殖和细胞周期都没有明显影响， 但对ConA刺激的T细胞行为有明显影响。ConA刺激12 h后, T细胞表面CD69表达百分率 为(63.12±3.07)%，终浓度为1/5120的QKL，有降低CD69表达的趋势，但与ConA 相比， 没有显著差异；加入1/1280的QKL后，CD69表达率降低至(56.24±2.43)%，与ConA 对照 相比，有显著差异；1/320和1/80的QKL，CD69表达率分别降低为 (51.89±2.77)%和 I 中英文摘要 (39.09±1.39)%，与ConA对照相比，有极显著差异。QKL可抑制ConA刺激的细胞增殖， 浓度为1/5120时，MTT和WST-1法测得的OD值及CFDA-SE法测得的增殖指数 （Proliferation index, PI）与ConA刺激对照组相比，有显著差异，浓度高于1/2560时，与 ConA对照相比，有极显著差异，三种方法检测QKL抑制ConA刺激的细胞增殖作用的EC50 分别为：1/405.34、1/551.14和1/435.73；QKL对ConA 刺激的细胞周期分布影响没有周期 特异性，表现为：QKL增加ConA刺激的细胞中处于S期和G2/M期的细胞数目，降低处 于G0/G1期的细胞数目，增加Sub-G1期细胞数目，但最高浓度时（1/160原液）G2/M期 细胞降低，Sub-G1细胞明显增加；QKL可抑制Mφ的吞噬功能，表现为：未加药组Mφ 吞噬CFDA-SE标记的E.Coli 2 h后，荧光强度明显增强，吞噬率为(61.33±2.45)%。加入 终浓度为1/2700、1/900、1/300和1/100的QKL后吞噬率分别降低至(57.62±1.67)%、 (53.55±2.30)%、(48.92±2.01)%和(39.32±0.68)%；QKL可以降低LPS激活的Mφ产生NO的 量；对小鼠胸腺细胞的自发凋亡和DEX诱导的细胞凋亡都有显著的拮抗作用，与对照相 比，均为P0.01。 结论：QKL对小鼠免疫功能有多种调节作用：可有效抑制多克隆刺激剂诱导的小鼠 T细胞的早期活化和增殖，对细胞周期分布也有明显影响，但没有周期特异性；可抑制 腹腔Mφ的吞噬功能和激活后NO的产生，拮抗胸腺细胞的凋亡。结果提示QKL能有效抑 制机体免疫功能，不仅对特异性细胞免疫功能有抑制作用，对非特异性免疫功能也有的 抑制作用，这种免疫抑制作用可能是QKL临床治疗免疫相关