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6-姜酚肟对 PC12 细胞的抗凋亡保护作用和促分化作用
摘 要
目的:建立谷氨酸诱导PC12 细胞凋亡的模型,探讨 6-姜酚肟对谷氨酸诱导 PC12 细胞凋
亡的影响;建立 NGF 诱导 PC12 细胞分化的模型,探讨 6-姜酚肟对 NGF 诱导 PC12 细胞
分化的影响。
方法:体外培养 PC12 细胞,倒置显微镜下观察活细胞形态。用谷氨酸造成细胞损伤,MTT
法检测细胞活力,流式细胞术和 Hoechst 33258 DNA 染色法检测细胞凋亡,比较各种浓度
的 6-姜酚肟对 PC12 细胞凋亡的影响;用 NGF 诱导 PC12 细胞分化,倒置显微镜观察 6-姜
酚肟和NGF 对 PC12 细胞分化和突起生长的影响并拍照;采用免疫荧光技术检测各组 PC12
细胞中突触素的反应的阳性强度。
结果:(1) 经 2.50~20.00 mmol/L谷氨酸处理24 h后,PC12 细胞的活力比对照组明显降低,
细胞存活率随谷氨酸浓度的升高而降低。谷氨酸对PC12 细胞活力的半数影响浓度(IC50 )
约为 5.00 mmol/L 。(2) 在一定浓度范围内,6-姜酚肟能保护PC12 细胞免受谷氨酸的影响,
但是在较高浓度时6-姜酚肟对细胞有一定的毒性。经不同浓度的6-姜酚肟(3.13, 6.25, 12.50,
25.00 μg/mL )预处理后,PC12 细胞活力明显提高,其保护作用随其浓度降低而提高。当
浓度为 6.25 μg/mL时效果最好,细胞存活率达到 75.20% (P0.01 ),当浓度为3.13 μg/mL
时对细胞的保护能力有所下降,细胞存活率为 70.24% (P0.01 )。(3) 谷氨酸能诱导PC12
细胞凋亡,5.00 mmol/L的谷氨酸处理24 h后细胞凋亡率为 20.10% 。经6-姜酚肟(3.13, 6.25,
12.50, 25.00 μg/mL )预处理后,细胞凋亡率明显降低,分别为 3.50% (P0.01 ),2.80%
(P0.01 ),9.60% (P0.01 ),17.7% (P0.05 )。(4) NGF能诱导PC12 细胞分化,10 μg/L
与 50 μg/L 的NGF作用PC12 细胞 48 h后,分化细胞的百分比和阳性突起数目与对照组相比
均明显增加(P0.01 ),50 μg/L 的NGF作用效果强于 10 μg/L 的NGF 。6-姜酚肟和 10 μg/L NGF
共同孵育PC12 细胞 48 h后,细胞的分化情况与 50 μg/L 的 6-姜酚肟单独作用相似。(5) 6-
姜酚肟单独作用于PC12 细胞时,免疫荧光突触素染色阴性。6-姜酚肟和 10 μg/L NGF共同
作用时的荧光强度与 50 μg/L NGF单独作用时的荧光强度相似,两者无明显差别(P0.05 )。
结论:(1) 谷氨酸能诱导 PC12 细胞凋亡,较低浓度的 6-姜酚肟能有效对抗 Glu 诱导的 PC12
I
细胞凋亡而保护细胞,其中 6.25 μg/mL 的 6-姜酚肟效果最好。
(2) NGF 能诱导 PC12 细胞向神经元样细胞分化。6-姜酚肟单独作用不能引起 PC12 细胞分
化,但它能使低浓度 NGF 诱导 PC12 细胞分化的能力增强,使之达到高浓度 NGF 的效果。
关键词:6-姜酚肟;谷氨酸;PC12 ;凋亡;NGF ;突触素;分化。
I
Protective effect of 6-gingerol oxime on apoptosis and its effect of
promotion on differentiation in PC12 cells
Abstract
Objective: The model of apoptotic PC12 cells induced by Glu was established to investigate the
effect of 6-gingerol oxime on Glu-induced
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