GDF-9和信号蛋白smad3与PCOS大鼠卵巢组织病变的相关性研究.pdfVIP

暨南大学硕士论文 GDF-9和信号蛋白smad3与PCOS大鼠卵巢组织病变的相关性研究 GDF-9 smad3 GDF-9 smad3 GGDDFF--99和信号蛋白ssmmaadd33与PCOS大鼠卵巢组织病 变的相关性研究 中文摘要 多囊卵巢综合征（PCOS）是指女性青春期发病，卵泡膜细胞良性增生引 起雄激素生成过多，以月经紊乱、持续排卵障碍、高雄激素症、卵巢多囊样 变为临床特征的生殖功能障碍与糖代谢异常并存的内分泌紊乱综合症。 PCOS 病理特征表现为窦前卵泡发育过多而优势卵泡发育受阻，卵巢血管增 生引起的卵巢增大，包膜增厚等病理改变。目前，PCOS 的病因和发病机制 仍未完全清楚。有关 PCOS 卵泡发育障碍的病理研究有诸多报道，而有关卵 巢组织病理改变研究报道甚少。 近年来，PCOS 病理及发病机制的研究多集中在卵巢局部细胞调控因子调 节的病理生理过程，而卵巢局部内环境紊乱和细胞因子表达及其作用的共同 通路信号蛋白的研究成为研究的关注热点。在众多的卵巢局部的细胞调控因子 中，生长分化因子-9（GDF-9）作为目前已知卵巢表达的转化生长因子β （TGF-β）超家族重要因子,主要由卵母细胞分泌，对卵泡发育至关重要。TGF- β超家族信号从细胞膜传入细胞核，与信号蛋白 smads 家族偶联调节细胞核 基因表达，完成一系列完整的调控过程成为研究的关注点之一。信号蛋白 smad3 作为 TGF-β超家族信号通路的关键分子，把信号传至细胞核，smad3 的量或功能的改变影响卵泡发育的调节，并且与卵巢组织纤维化、血管生成 等病理改变有关。 本研究主要通过大鼠PCOS 病理模型的制作，在模型基础上研究 GDF-9 及信号蛋白smad3 在卵巢局部的定位、分布及表达和作用，进一步分析探讨 两者与 PCOS 卵巢局部微环境的调节紊乱的相关性。对 GDF-9 及信号蛋白 smad3 信号传导通路及其中关键的分子表达状况的深入研究，有助于进一步 阐明 PCOS 的发病机制，为 PCOS 的病因研究和临床治疗提供一种新思路。 本研究分三部分： 目的 I 暨南大学硕士论文 GDF-9和信号蛋白smad3与PCOS大鼠卵巢组织病变的相关性研究 1．探讨 GDF-9 在PCOS 大鼠模型中的定位、分布及表达和作用，分析GDF-9 与PCOS 卵泡发育异常、卵巢组织病理变化的相关性。 2．探讨 GDF-9 信号通道的关键分子信号蛋白 smad3 在 PCOS 大鼠卵巢组织 中的定位、分布及表达和作用，分析信号蛋白smad3 与PCOS 卵巢组织增生 等病理改变相关性。 3．分析 GDF-9 和信号蛋白 smad3 在信号通路相互作用，探讨二者 PCOS 大 鼠卵巢组织病理改变的发生机制，为PCOS 的病因研究提供实验参考依据。 方法 1. PCOS 大鼠模型制作 选择标准养殖的幼年 SD 雌性大鼠 43 只，随机分 为两组后，采用皮下注射脱氢表雄酮（DHEA）法制作大鼠 PCOS 病理模型。 2. 卵巢组织湿重测量 取双侧卵巢组织，修剪掉脂肪组织，去血污，称重， 取双侧重量平均值。 3．生殖相关激素测定 收集动脉血液，采用放射免疫法检测血清雌二醇(E2)、 催乳素（PRL）、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平，计算 卵泡刺激素/黄体生成素(FSH/LH)比值。 4．病理组织形态学分析及鉴定 取卵巢组织后固定石蜡包埋，采用 HE染色 的方法进行病理组织形态学观察和分析，并在显微镜下计数窦前卵泡。 5. 模型评价及筛选 通过阴道脱落细胞涂片法观察动情周期，于动情间期取 卵巢组织和血清标本，参照阴道脱落细胞涂片、血清激素水平、卵巢组织病 理变化等指标，筛选造模成功的动物用于下一步实验。 6. 卵巢间质微血管定量分析 用常规石蜡包埋切片法制片，用免疫组织化学 方法anti-CD34 标记微血管并检测各组大鼠卵巢间质微血管密度，进行统计 学分析。 7．蛋白定位及半定量分析 采用免疫组织化学（Immuno-Histochemistry，IHC） 方法分别标记 GDF-9和 smad3，观察其在卵巢的定位、分布，并采用图像分