Rho激酶对大鼠海马神经元突起生长和细胞骨架分布的调节.pdfVIP

中文摘要 目的：探讨 Rho 激酶对大鼠海马神经元突起生长和细胞骨架的调节。 材料和方法：以原代大鼠海马神经元为观察对象，用 Rho 激酶激动剂 LPA 和抑制剂 Y-27632 改变细胞内 Rho 激酶的活性，分别用时差显微成像技术观察神经元突起生长的 动态变化，激光共聚焦显微镜观察细胞骨架分布的变化。 结果：(1) 时差显微成像结果：对照组神经元一级、二级突起不断形成，向外延伸，在 末端形成三级突起；LPA 组神经元大部分突起进行性塌陷，突起数量减少，且较细小； Y-27632 组神经元胞体上多个一级突起形成，延伸较远，再分支现象明显，在远侧二级、 三级突起生长迅速；Y-27632 ＋LPA 组神经元一些细小的一级突起退缩消失，其余突起 不断分支、延伸，一级、二级、三级突起数量和长度较 LPA 组增加；LPA ＋Y-27632 组 神经元一级突起逐渐停止塌陷，然后向外延伸，二级突起生长迅速，在其远侧可见三级 突起和细小的四级突起形成。(2) 激光共聚焦显微镜结果：神经元胞体、突起均有清晰 的微管和微丝分布，在细小突起、突起末梢及丝状足内微丝分布较多；LPA 组神经元与 对照组相比，各级突起尤其是次级突起缩短，数量减少，微管、微丝在突起内分布减少 明显，丝状足很少；Y-27632 组神经元突起分支长且多，微管、微丝沿胞体和突起分布， 突起远端及小分支上微丝的分布较多，有多个细长的丝状足在突起上形成；在 LPA ＋ Y-27632 和 Y-27632+LPA 组神经元各级突起均较丰富，与 LPA 组相比微管和微丝表达 有明显改善，在突起远端有较丰富的丝状足。 结论：(1) 抑制 Rho 激酶可促使神经元突起各级分支数目增加和突起生长。(2) 激活 Rho 激酶可诱导神经元突起坍塌，表现为各级突起数目的减少和长度的缩短。(3) 激活 Rho 激酶后再抑制或抑制 Rho 激酶后再激活，Rho 激酶诱导神经元突起回缩的作用均下 调，神经元突起继续生长，各级分支数目增加。(4) Rho 激酶可以通过调节细胞骨架的 分布参与突起的生长、延伸及分支形成。 关键词：Rho 激酶 突起生长 细胞骨架 时差显微成像 激光共聚焦 神经元 海马 大鼠 I ABSTRACT Objective： Investigating regulation of Rho kinase to neurite growth and cytoskeleton distribution in hippocampus neurons Materials and methods: Primarily cultured neurons from hippocampus of postnatal rat were treated with Rho kinase activator LPA or inhibitor Y27632 to change Rho kinase’s activity. Then the dynamics of neurites outgrowth were surveyed by time-lapse microscopy, and the distribution of cytoskeleton in neurons were observed by laser confocal microscopy. Results: (1) Observed by time-lpase microscopy: The new first-level and second-level neurites in control neurons contiuously developed and extended, meanwhile the third-level neurites were formed at the end of second-level neurites. After