苯丙胺对PC12 细胞AKT GSK-3β CRMP-2信号通路的影响.pdfVIP

暨南大学硕士论文 苯丙胺对PC12 细胞AKT/ GSK-3β/CRMP-2 信号通路的影响 中文摘要 目的： 探讨苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用和机制。 方法： 将PC12细胞分为四组：空白对照组，苯丙胺组(2mM)，苯丙胺加NGF(神经生长因子) SB216763 24h 组，苯丙胺加 组。各组培养 后，采用倒置显微光镜，免疫荧光技术及免疫印 迹法观察苯丙胺对PC12细胞的神经毒性作用以及对AKT/GSK-3β/CRMP-2信号通路的影 响，并且观察该信号通路上游激活剂NGF和下游GSK-3β的抑制剂SB216763能否减轻苯丙 胺对PC12细胞的神经毒性作用。 结果： 1．倒置显微光镜形态学结果：空白对照组PC12细胞膜光滑，边界清晰，胞体饱满， 透光，多呈椭圆形或梭形，有两条或以上的细长突起，许多细胞的突起交织在一起形成网； 苯丙胺组与空白对照组相比，细胞体萎缩，呈圆形，突起变短、消失(P0.05) ，突起形成 NGF SB216763 的网状结构消失；苯丙胺加 组和苯丙胺加 组与苯丙胺组相比，突起长度增长 (P0.05) (P 0.05) 。四组的细胞计数进行比较，差异无显著性 ﹥ 。多巴胺免疫荧光技术观察 PC12细胞，各组间细胞长度的变化与上述的基本一致，各组细胞胞体及突起内都有多巴胺 激发的荧光，其中空白对照组细胞及突起内多巴胺荧光强度比其他各组的更强，苯丙胺组 与其他各组相比，多巴胺细胞的数量有所减少。 2 ．苯丙胺、NGF及SB216763对AKT/GSK-3β/CRMP-2信号传导通路中蛋白表达的影响： 1)TrkA和P-TrkA ：苯丙胺组与空白对照组比较，TrkA和P-TrkA 的表达差异均无统计学 意义(P ﹥0.05) 。苯丙胺加NGF组和苯丙胺加SB216763组P-TrkA 的表达与苯丙胺组相比均增 多，差异有显著性(P0.05) ，但TrkA 的表达与苯丙胺组相比，差异均无统计学意义(P ﹥0.05) 。 2)AKT和P-AKT ：苯丙胺组与空白对照组相比，苯丙胺组P-AKT 的表达减少，差异有 显著性(P0.05) 。苯丙胺加NGF组和苯丙胺加SB216763组与苯丙胺组相比，P-AKT 的表达 增加，差异有显著性(P0.05) 。而AKT 的表达在各组间的差异无统计学意义(P ﹥0.05) 。 3)GSK-3β和P-GSK-3β：苯丙胺组与空白对照组相比，苯丙胺组P-GSK-3β表达减少， 差异有显著性(P0.05) ；而苯丙胺组GSK-3β表达增加，差异有显著性(P0.05) 。苯丙胺加 NGF组与苯丙胺组相比，苯丙胺加NGF组P-GSK-3β的表达增加有显著性(P0.05) ，GSK-3β (P 0.05) SB216763 SB216763 表达差异无显著性 ﹥ 。苯丙胺加 组和苯丙胺组相比，苯丙胺加 I 暨南大学硕士论文 苯丙胺对PC12 细胞AKT/ GSK-3β/CRMP-2 信号通路的影响 组P-GSK-3β的表达差异无显著性(P ﹥0.05)，苯丙胺加SB216763组GSK-3β表达减少，差异 有显著性(P 0.05) 。 4)CRMP-2和P-CRMP-2 ：苯丙胺组与空白对照组相比，苯丙胺组P-CRMP-2 的表达增多， 差异有显著性(P0.05) ，苯丙胺加NGF 组和苯丙胺加SB216763 组与苯丙胺组相比， P-CRMP-2 的表达均减少，差异有显著性(P0.05) 。CRMP-2在各组间的表达差异无统计学 (P 0.05) 差异 ﹥ 。 结论： 苯丙胺可以抑制PC12细胞突起的生长，其机制可能与抑制AKT/GSK-3β/CRMP-2信号 通路有密切关系。2mM浓度的苯丙胺对PC12细胞数量无明显影响。AKT/GS