海洋放线菌素X2的抗肿瘤和抗病毒研究.pdfVIP

海洋放线菌素 X2 的抗肿瘤和抗病毒研究 摘 要 目 的 研究海洋放线菌素 X2 的生物学活性，主要是抗肿瘤和抗病毒活性的研究。 方 法 1.利用 MTT 法检测不同浓度的海洋放线菌素 X2 对正常和肿瘤细胞的抑制作用；FCM 测定海洋放线菌素 X2 对 HepG-2 细胞周期、细胞凋亡的改变；经 Hoechst 33258 (8g/L) 染色进行形态学观察。 2.采用 MTT 法检测不同浓度的海洋放线菌素 X2 作用病毒后的抑制情况；采用 RT-PCR 和 FCM 分别测定 CVB3 诱导的 ECV304 细胞在海洋放线菌素 X2 作用前后不同时间 点的 ICAM-1 和 VCAM-1 的 mRNA 和蛋白的表达水平；采用免疫细胞化学方法半定 量分析 CVB3 诱导的 ECV304 细胞在海洋放线菌素X2 作用前后不同时间点的NF- κB 的活化情况。 结 果 1、海洋放线菌素X2 对多种肿瘤细胞都有抑制作用。在对 HepG-2 细胞增殖的研究中发 现这种抑制作用具有时间-剂量依赖性，FCM 检测发现 HepG-2 细胞细胞周期受到阻 滞，停留于 S 期和 G2/M 期，细胞发生凋亡，荧光显微镜下观察发现 HepG-2 细胞中 出现核固缩、凋亡小体。 2 、海洋放线菌素X2 在病毒吸附前对 H1N 1、CVB3 的 SI 分别为 47.66 和 63.88。 3.CVB3感染ECV304促进VCAM-1 和的ICAM-1 mRNA 表达，54h 内表达均有增加，CVB3 组、CVB3+X2组与对照组相比差异有显著性（P＜0.05）.其中VCAM-1 mRNA 表达在 感染 12h 达到高峰，12h-24h 表达量显著高于其他时间（P＜0.05）；ICAM-1 mRNA 表达在感染后显著增加（P＜0.05），24h-54h 维持于高水平。海洋放线菌素 X2 干预 后，分别于12-54h、24-54h降低 VCAM-1 和 ICAM-1 mRNA 的表达，与CVB3 组相 比差异有统计学意义（P＜0.05）。 4. CVB3感染ECV304，细胞表达 VCAM-1 和 ICAM-1 蛋白在 12h-54h 显著高于对照组（P ＜0.05）。海洋放线菌素X2干预后，分别于12h-24h、12h-54h降低VCAM-1 和 ICAM-1 蛋白的表达，与 CVB3 组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。 5. 免疫细胞化学方法和图像分析显示，ECV304 经 CVB3 感染 3h 后 NF- κB 表达明显增 Ⅰ 强，活化入核细胞数增多，光密度值增加，与对照组相比较，差异有统计学意义（P ＜0.05）。海洋放线菌素 X2 干预后，1h、3h 时 NF- κB 的活化较 CVB3 组增强，而 6h-24h 时，NF- κB 的活化受到明显抑制，表达下降。 结论 1. 海洋放线菌素X2 可抑制肿瘤细胞的增殖，均表现出时间-剂量依赖关系；阻滞HepG-2 的细胞周期并可诱导其发生凋亡，形成凋亡小体。 2. 海洋放线菌素 X2 在病毒吸附前对 H1N1 、CVB3具有抗病毒作用， 3. 海洋放线菌素 X2 可能通过抑制 NF- κB 活化，下调 CVB3 诱导的 ECV304 细胞 ICAM-1、VCAM-1 的mRNA 和蛋白表达。 关键词 海洋放线菌；细胞周期；凋亡；柯萨奇病毒；细胞间粘附分子；血管细胞粘附分子；核 因子- κB ； Ⅰ On the studies of anti-tumor and anti-virus effect of marine actinomycin X2 ABSTRACT OBJECTIVE Study on the biologic activity of marine actinomycin X2. The main research is about anti-tumor and anti-vira