呋喃它酮代谢物AMOZ单克隆抗体的制备及免疫学检测方法的研究.pdfVIP

摘 要 目的：用自制的抗 AMOZ 单克隆抗体建立检测组织样品中 AMOZ 残留的间接竞争 ELISA 和胶体金免疫层析法。 方法：AMOZ 与对醛基苯甲酸（4-CBA ）反应，衍生成半抗原 CP-AMOZ，采用活化 酯法将 CPAMOZ 与载体蛋白牛血清白蛋白（BSA ）、卵清蛋白（OVA ）分别偶联制备完 全抗原，高效液相色谱质谱法（LC-MS ）、SDS、紫外光谱扫描鉴定抗原合成效果。 通过免疫 BALB/c 小鼠、杂交瘤制备技术制备抗 CPAMOZ 的单克隆抗体，并对其效价、 亚类、特异性等方面进行鉴定，建立检测组织样品中 AMOZ 残留的间接竞争 ELISA 和胶 体金免疫层析检测方法。 结果：1.成功合成 AMOZ 的衍生物CPAMOZ 及完全抗原 CPAMOZ-BSA 及 CPAMOZ-OVA 。2.成功获得稳定分泌抗 CPAMOZ 单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该细胞株 分泌的抗体效价高，属于 IgG1 类抗体，与 CPAMOZ 特异性结合，与载体蛋白 BSA 、OVA 及硝基呋喃类代谢物及其衍生物交叉反应均小于 1%。3.建立了检测 AMOZ 的间接竞争 ELISA 法，IC50 为 0.86 μg/ L，最低检测限(LOD)为 0.07 μg/ L，组织样品的样品回收率为 81.48%-85.24%；胶体金免疫层析法的最低检测限为 5 μg/ L 。 结论：1.成功制备了呋喃它酮代谢物 AMOZ 的完全抗原及单克隆抗体，该抗体灵敏度 高，特异性好。2.成功建立了能用于检测组织样品中 AMOZ 残留的间接竞争 ELISA 法和 快速、灵敏、稳定的胶体金免疫层析法。 关键词：AMOZ ；单克隆抗体；间接竞争ELISA ；胶体金免疫层析 I Abstracts Objectives: To develop a competitive inhibition enzyme-linked immunosorbent assay (ciELISA) and colloidal gold probe-based immunochromatographic assay for the detection of AMOZ in tissue sample by the the monoclonal antibodies (mAbs) against the Metab olite of Furaltadone, 5-morpholino-3-amino-2-oxazolidone (AMOZ). Methods: Firstly, AMOZ was reacted with 4-CBA and the hapten CPAMOZ was sy nthesized .The derivates were conjugated with BSA and OVA for complete antigens by using activated ester method. SDSand the ult-raviolet spectra were used to identif y the artificial antigens. Five BALB/c mices were inmunized with CPAMOZ-BSA and th en the hybridom cell lines secreting monoclonal antibody against CPAMOZ were establis hed