养殖塘生态体系大肠杆菌的抗生素耐药性及耐药基因研究.pdfVIP

摘要摘要 摘要摘要 本研究以广东省佛山市南海丹灶镇以饲养草鱼和鸭为主的养殖场作为研究对象，探讨 了养殖塘生态体系中大肠杆菌的耐药水平及其携带耐药基因的流行情况。采集样本包括组 成养殖塘生态体系的肉鸭及鸭生活圈水土、草鱼以及鱼生活圈水土，经平板初筛以及PCR 分子生物鉴定共分离大肠杆菌112株。其中包括鸭肠源50株，鸭水源20株，鸭土源15株，鱼 肠源10株，鱼水源12株，鱼土源5株。 采用WHO推荐的KirbyBauer纸片扩散法检测并分析养殖塘大肠杆菌对15种抗生素 （呋 喃妥因、链霉素、甲氧苄啶、氨苄西林、青霉素、复合磺胺、萘啶酸、红霉素、头孢噻肟、 复方新诺明、四环素、氯霉素、新霉素、头孢他啶以及氟苯尼考）的耐药率及多重耐药情 况。体外敏感试验结果显示养殖塘大肠杆菌多重耐药现象较普遍，耐药重数多，耐药谱广： 85%的菌株对3种或3种以上抗生素耐药，其中1株15重耐药，2株14重耐药；2重耐药和13 重耐药的大肠杆菌出现最为频繁，占总菌株的25.5% 。大部分菌株对氨苄西林/青霉素/ 甲氧 苄啶/萘啶酮酸/ 四环素表现共同耐药，但对头孢噻肟，呋喃妥因以及头孢他啶较为敏感。 本研究同时应用了多重PCR技术构建了一个7重PCR反应体系用于检测sulI 、blaSHV 、 catI、dhfrV 、floR 、aadA 和blaOXA耐药基因；两个六重PCR反应体系分别用于检测blaTEM、 cmlA 、CIT、ereA、dhfrI 、aac(3)-I耐药基因和aphA1 、MOX 、DHA 、EBC 、aac(3)-IV 、FOX 耐药基因。结果表明，来自不同类别的112株大肠杆菌被检出有15种耐药基因 （ereA 、 aac(3)-1 、DHAM 、FOXM基因未检出），101株样品同时携带1种或1种以上的耐药基因， 占样品总数的 90.2% ；其中7株携带7种耐药基因，4株携带6种耐药基因，同时携带4种耐 药基因的大肠杆菌出现的频率最高，其检出率为29.5% 。其中 内酰胺类耐药基因检出率为 blaTEM ＞blaSHV ＞blaOXA ；氨苄青霉素类耐药基因检出率为MOX ＞CIT＞EBC ；氯霉素 类基因检出率为cmlA ＞floR ＞catI ：氨基糖苷类耐药基因检出率为aphA1 ＞aadA ＞aac(3)-IV ； 磺胺类耐药基因sulI 的检出率为17.9%；甲氧苄啶类耐药基因检出率dhfrI ＞dhfrV 。在六类 样品中，鸭肠源和鸭水源的大肠杆菌所携带的耐药基因种类最为丰富，其耐药基因谱最广， 且各自携带的耐药基因谱并不相同；鱼肠源和鱼水源样品所携带的耐药基因谱以及检出率 最为相似；土壤类样品则较少检出耐药基因。cmlA/TEM/aadA耐药基因组合是六类样品中 共同出现的，说明耐药基因在动物与环境中相互传递的可能性极高。 最后采用三重PCR反应体系对74株耐药大肠杆菌的I、 II 、 III类整合酶进行扩增，结 果显示I类整合子在养殖塘生态体系中十分普遍，检出率达到87.8%，II类整合子检出率为 10.8%，未检出III类整合子。其中并未在7重耐药的菌株中检测到II类和III类整合子，说明I I 类整合子其携带耐药基因盒的多样性及其结构趋向复杂。II类整合子中发现携带的基因谱 全部为aadA/dhfrV/aphA-1/MOXM这种独特的组合，推测氨苄青霉类与氨基糖苷类的抗生素 产生耐药机制与II类整合子有密切的关联。 由于养殖业大量的使用抗生素，在养殖厂内已经形成了长期的、多样的抗生素压力。 在这样的条件下，为耐药菌的生存与诱发突变提供的适合的条件。实验结果说明绝大部分 大肠杆菌都对超过一种抗生素产生耐药性，而且耐药机制十分复杂。基因盒中的耐药基因 越来越多样化。本实验通过对鱼鸭混养的养殖进行研究，证明部分耐药基因在不同物种间、 动物与环境间有效的传播。这样使耐药基因的控制更为复杂，细菌更加容易获得多重耐药 性。只有减少日常性的抗生素使用，对不同的疾病有针对性的用药，改善养殖环境，才是 控制耐药性形成与扩散的最佳方法。 关键词