柑桔胚珠培育及胚状体发生的研究.pdfVIP

果 树 科 学 ，T (1)：l9—24， l9口0 J Fruit Sc1． 柑桔胚珠培养及胚状体发生的研究 吴金虎 陈吉笙 章文才 万蜀渊 (华 中 农 业 大 学) 捕 量 选用 槿‘柑’ 锦‘橙 、 橇‘叶橙’、 华‘农本地早’花后T周幼果胚珠进行 培养，其强状律发生的百分率分别是：4吕．5 、21．2 、19．8 、6．4 ；胚性禽伤组织 则 为 ： 28．2 、13．5 、15．B 5．B ．各品种胚状体和胚性禽伤组织发生的百分率明显不同，与品 种胚数多少相一致．不同激素和有机物对柑桔旺珠培养、胚状体的发生及 性愈伤组织形成产 生不 同的謦响．多单胚的 华‘农本地早’仅从基本培养基中产生胚状体和胚性愈伤组织．胚 珠 培养中，胚状体发生的方式 ，根据来源不 同分为三种：第一种是 由胚珠 (或已黄的球形胚上 ) 长出白色的胚性愈伤组织，继而产生胚状体；第二种是在 已分化的幼苗下胚轴或根部产生胚 性 愈伤组织和胚状体；第三种是在畸形胚上直接不断的分化出胚状体． 关曩诩 柑桔；胚珠培养：体细胞胚胎发生；胚性愈伤组织：胚状体 我国柑桔生产的主要问题是周期性冻害干¨病毒病危害，通过育种培养抗寒优质无病毒的 品种是解决这些问题的重要途径 。但是，珠心胚干扰 遗传上高度杂台性 以及育种周期长， 影响着柑椿品种改 良进展。柑桔上应用普通愈伤组织分离的原生质体没有再生出植株 (1]． 自I％72年Kochba(I2]培养珠心组织以来，许多研究者 (6] (12)应用胚殊或珠心愈伤 组 织 能够成功地从单细胞，原生质体通过胚状体途径冉生出植株。Oh~awafa等 (11)用 特‘罗 维 塔’(Trovlta)甜橙胚珠愈伤组织的原生质体和 枳‘壳’叶片的原生质体融合，首次利 用 组 织培养技术 ，通过胚状体造径，在柑桔植物中诱导出体细胞杂种植株，为解决柑桔珠心胚的 干扰获得杂种植株探索了一条新的途径。本研究的目的是从几个优 良柑桔品种中建立起胚性 愈伤组织系，研究各个不同种类和品种胚性愈伤组织保存及胚状体诱导方法，促进胚状体萌 发成苗。 材 料 和 方 法 研究于1985--1986年进行。选湖北秭归县柑桔研究所的 锦‘橙 、桃‘叶橙 ’(Cit~“ssinensis Osbeck)成年树 ，华 中农业大学育种圃的 槛‘柑 、 华‘农本 地 早， (CjtJsreticulata Blsnco)成年树 。采花后 7周的幼果，自来水冲洗后，放入5℃的普通冰箱 中，在超净工作 台上，用75％酒精授 2～3秒钟，随后用5 的次氯酸铺加0．1％TweenS0浸泡8分钟 ．无 菌水冲洗 3～5次。幼果横切，在双 目解剖譬下用尖手术刀挑起幼嫩胚璩，每一试管中放3 个幼果的胚璩进行培养。 胚璩培养主要采用MTE1o)基本培养基，附加5 蔗糖I生长素为IAA．檄动素为KT， ；孬 ： ■ 一 ·_量 一片由瘩箨新阿毫拍-，取样中再搿麓 韩归县柑精拜究所主持和帮_，囊 量● ． 20 果 树 科 学 T卷 6一BA 1硫酸腺嘌呤 (SAD)|赤霉素 (GA。)，有机物质；水解酪蛋白(cH)、水解 乳蛋 白、半乳糖 。 用解剖显微镜观察愈伤组织、胚状体的发生。另外辅助组织学切片观察，采用 FAA 固 定，石蜡 啪片番红、同绿对染法，石蜡切片在奥林巴斯万能显微镜下观察。 结 果 一 、 不 同种类和品种对柑桔胚珠形成胚状体爱胚性愈伤组织 的膨响 花后7周进行了 槛柑，． 锦橙，． 桃叶橙’、 华‘农本地早’胚珠培养，各品种 反应明显不同。 结果丧刖：形成胚状体与胚性愈伤组磐{的能力 撞 柑 ’最强， 锦‘橙’、 桃叶橙 ’ 次之j 华农率．地早，最差。经 t测验，不简种类和品干1t阈形成胚状体的能力， 诬‘柑’与 锦橙，、 桃叶橙，、 华农本地早，比较，差异非常礁著j 锦橙’、 桃 叶 橙 ’与