南方鲇CART基因cDNA克隆分析及组织分布.pdfVIP

2013年j周 重庆师范大学学报(自然科学版) Mav2013 of Normal Science) V01．30No．3 第30卷第3期 JournalChongqingUniversity(Natural 动物科学 南方鲇CART基因cDNA克隆分析及组织分布+ 彭焕文，杨 雁，尹传龙，李艳利，张昊星 (西南大学淡水鱼类资源与生殖发育教育部重点实验室，重庆400715) 摘要：采用RT—PCR和RACE技术克隆得到南方鲇(Si，“rM5，，JPridio，2“，^)的CA尺丁基因的全长cDNA序列，全长688 bp，其中5’非翻译区长109bp．()RF长357bp，3’非翻译区222bp．编码118个氯基酸。与其他脊椎动物的CART蛋白氨 基酸序列比对发现，南方鲇CART与斑点叉尾鲴(k细f“r“s CART2、鲤鱼(C．vpri，j“s(，“r声胁)CARTl、鲤鱼CART2和人(HoⅢD 基于形态学的鱼类系统发育结论相吻合。组织分布分析表明南方鲇CAR丁基因mRNA主要在脑中表达，与之功能相吻 合。研究结果为该种鱼摄食调控机制的研究提供了新的基础资料。 关键词：南方鲇；(H尺T基因；克隆；分析；mRNA；组织分布 中图分类号：Q959．4；Q785 文献标志码：A am— 可卡因一苯丙胺调节转录肽(Cocaine—and能起调节摄食作用，这还需要在更多物种中研究确 phetamine—regulatedtranscript，CART)于1981年发定：j8‘“。7]。 现自羊((bis“，．娩s)的下丘脑，并测得了部分序列一1， 但当时该肽的功能未知。Dou91ass等人2一发现大鼠 区一”j，属于肉食性鱼类，是重要水产养殖对象。该鱼 (R乜ff“s舢rrPgif“N)经过注射可卡因和苯丙胺后，下 丘脑纹状体的CART基因mRNA水平增高，且其部生活习性特殊、摄食量大、生长速度快、耐饥饿’1”21I， 分序列可编码前述羊下丘脑中的未知肽一1。此后，对 摄食行为生理特征有典型代表意义。南方鲇特殊动力 啮齿目动物(Glires)和人类(H(JmoN“声i删s)的研究发 作用(SDA)总耗能大和摄食代谢峰值高，饥饿后摄食 现，至少存在6种CART蛋白或多肽。3“。近年来研代谢相关系数和消化系统组织结构有明显变化一2：％一， 究者成功克隆了多种动物的CA尺丁基因序列。如青锵 但它的摄食调控相关分子机制尚不清楚。本研究克隆 (()ryzi“sZ“fi户Ps)一。一、金鱼(Cnr“ssi“s““rnf“s)【¨、鲤了南方鲇CART基因cDNA序列，并对该序列进行生 物信息学分析，以便为今后研究该种鱼的摄食调控分 鱼(Cpri聍“sf“rpio)一7、大西洋鳕((五d“s，o砌““)～“、 大西洋鲑(S“Z埘osn，“r)[(“、比目鱼(PZP“，．o”PffPs 子机制提供基础资料。 “，ne，-if口订“s)_lo J、斑点叉尾鲴(jPf以Z“r“s声“”Pf““s)。¨一 1材料和方法 等。研究表明。CART蛋白参与动物的多种生理过 程，如摄食、奖赏和强化、感觉处理、内分泌调节和精神 1．1材料和试剂 2。15 焦虑行为[I 1以及刺激能量消耗和调节下丘脑垂体 材料：实验鱼为本实验室人工繁殖的雌性南方鲇 轴[1印等。在鱼类中，金鱼在摄食后脑中(：彻T基因幼鱼，体质量(100±5)g，经过14d驯化后进行组织 mRNA水平升高，食物缺乏时脑中G银T基因mRNA表达样品(脑、肝脏、肾脏、心脏、胃、肠和鳃)的采集，样 的水平降低』’1¨；斑点叉尾鲴脑中的(?AR丁基因mR—本量，z一3。驯化期间采用曝气24h以上的自来水，水 NA水平也随摄食状况而改变