基于谷胱甘肽-磁性微粒的GST融合蛋白纯化体系的建立.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2009, August 25; 25(8): 1254-1260 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ © 2009 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved 生物技术与方法 -GST 1 2 1 1, 2 1, 2 朱晶晶 , 杨柳 , 杨磊 , 陈超 , 崔亚丽 1 , 710069 2 , 710069 : 本研究将还原型谷胱甘肽(GSH)共价结合在异硫氰酸根末端磁性微粒表面, 制备了具有超顺磁性的谷胱甘肽- 磁性微粒亲和介质, 以表面修饰有谷胱甘肽的磁性微粒为载体, 建立了谷胱甘肽巯基转移酶(GST) 融合蛋白的纯化体 系。对100 μL 细胞裂解液纯化体系所需磁性微粒用量、谷胱甘肽-磁性微粒与细胞裂解液的孵育时间、清洗条件等进行了优 化。以聚丙烯酰胺凝胶电泳对融合蛋白的纯度进行了检测, Bradford 方法对融合蛋白进行了定量测定, 对纯化得到的目 的蛋白进行了Western blotting 分析。结果表明, 每毫克异硫氰酸根末端磁性微粒对 GSH 的固定化容量为150 μg, 10 mg 谷胱甘肽-磁性微粒可满足 100 μL 细胞裂解体系中目的蛋白的纯化, 最佳孵育时间为40 min, 对GST 融合蛋白的平均纯化 量为516 μg 。本方法快速、简便, 基于磁性微粒的分离还可实现自动化, 对GST 融合蛋白的纯化具有很好的应用前景。 : 磁性微粒, 还原型谷胱甘肽, GST 融合蛋白, 亲和纯化 Purification of glutathione-S-transferase fusion protein by glutathione coupled magnetic particles 1 2 1 1, 2 1, 2 Jingjing Zhu , Liu Yang , Lei Yang , Chao Chen , and Yali Cui 1 School of Life Sciences, Northwest University, Xi ’an 710069, China 2 National Engineering Research Center of Miniaturized Detection Systems, Xi ’an 710069, China Abstract: We established a purification system for glutathione-S-transferase (GST) fusion protein using glutathione coupled magnetic particle. Glutathione was coupled covalently to the surface of magnetic particles with isothiocyanate functional groups. Cell lysate, containing the fusion prot