种子细胞双相接种技术促进组织工程骨体外成熟的研究.pdfVIP

中华创伤杂志 2006年 4 月第 22 卷第 4 期 　Ch in J Traum a, Ap ril 2006 , Vol. 22 , No. 4 2·91 · ·基础研究 · 种子细胞双相接种技术促进组织工程骨 体外成熟的研究 吕仁发 　周强 　许建中　罗飞 　曾玲 　　【摘要 】　目的　比较观察双相接种法和静置接种法构建组织工程骨对种子细胞增殖 、分化和 成骨表达的影响 。　方法 　取健康志愿者骨髓 ,密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞并进行体 ( ) 外扩增 、诱导分化 ,然后应用双相接种法和静置接种法与脱钙骨基质 DBM 复合构建组织工程骨 , 体外培养 3周 ,用倒置显微镜 、扫描电镜观察细胞密度 、形态及基质分泌情况 ,并在不同时相点测 ( ) 定组织块中 DNA 含量 、碱性磷酸酶 AL P 活性及钙含量变化 。　结果 　倒置显微镜下双相接种法 构建的组织块可见大量具有一定折光性的梭形细胞存在于胶原基质中。扫描电镜见双相接种法 构建的组织块切面较平坦 ,孔隙较小 ,细胞包埋在胶原中 ,而静置接种法构建的组织块可见细胞 、 细胞外基质较少 。在体外培养过程中 ,双相接种法组织块中细胞的 DNA 含量 、AL P活性均高于静 置接种法 ,钙含量在培养 2周后高于静置接种法 。　结论 　双相接种法是一种高效的组织工程骨 构建方法 ,有利于提高接种效率和促进组织工程骨的体外成熟 。 【关键词 】　细胞培养 ; 　组织培养 ; 　干细胞 ; 　组织工程 Exper im en ta l study on in vitro ma tura tion of tissueeng in eered bone fabr ica ted w ith b ipha sic see d in g　　L R en f a, ZHOU Q iang, X U J ianzhong, L UO F ei, Z EN G L ing. D ep a rtm en t of O rthop ed ics, S ou thw es t H osp ita l, Th ird M ilita ry M ed ica l Un ivers ity, Chong qing 400038, Ch ina Corresp ond ing au thor: ZHOU Q iang, Tel: 0086 - 23 - 【A b stract】　O bjective　To ob serve the effect of the tissueengineered bone fabricated by b ip ha sic seeding m ethod on p ro liferation, differen tiation and o steogen ic exp re ssion of o steob last that is derived from hum an bone m e senchym al stem cells (M SC s) and seeded on to dem ineralized bone m atrix (DBM ) scaf fold. 　M ethods　Bone m arrow was ob tained from healthy adu lt volun teers and by u sing den sity gradien t centrifugation, to isolate m esenchym al stem cells that were then cu ltured in vitro. The tissueengineered bo