TSKgel液相色谱柱在单克隆抗体分离中的应用.pdfVIP

分离报告 No.074 TSKgel 液相色谱柱 在单克隆抗体分离中的应用 目录 1. 简介 1 2. 分离模式与纯化方法 1 3. 应用 3 4. 总结 8 3604 Horizon Drive， Suite 100，King of Prussia， PA 19406 1. 简介 2. 分离模式与纯化方法 近年来，随着生物技术的发展，单克隆抗体已 表1 例举了单克隆抗体分离分析中所采用的高 成为治疗药物和诊断试剂的主要成分。由于商业应 效液相色谱法分离模式及其主要特点。离子交换色 用不断增加，对单克隆抗体进行快速简单的纯化工 谱法（IEC）、疏水作用色谱法（HIC）及亲和色谱 作变得非常重要。关于使用高效液相色谱法 法（AFC ）具有较大的样本载量及较高的选择性； （HPLC）及 FPLC （快速蛋白液相色谱法）对单 就其本身而论，他们通常用于单克隆抗体的纯化。 克隆抗体进行纯化，已经有过很多研究报告；本分 几乎75%的单克隆抗体纯化使用到IEC，通常接续 离报告的结尾纳入了一组选定的参考文献。本文通 使用硫酸铵的疏水模式 （HIC）。尽管凝胶过滤色谱 过了几个应用实例介绍了 TSKgel 色谱柱在使用高 法（GFC）在分辨率和样品载量上稍显逊色，但其 效液相色谱法对单克隆抗体进行分析中的应用。 通常用作单克隆抗体制备的最终纯化方法及纯度 检验的手段。该方法还可用来去除二聚物及分子量 较大的多聚体。 表-1 用于单克隆抗体纯化的高效液相色谱法分离模式 分离模式 分离机制 TSK-GEL 特点 凝胶过滤 （尺寸排阻）色 分子大小 TSKgel G2000SWXL 尽管分辨率及样品载量劣于其他分离模式， 谱法 （GFC，SEC） TSKgel G3000SWXL 但它易于去除二聚物及多聚体。二聚体及多 TSKgel G4000SWXL 聚体是单克隆抗体产生免疫原性的原因。也 可用于最终产物的纯化或用作纯度检验。也 适用于分离 Fab 与 IgM （TSKgel G4000SWXL ）。 离子交换色谱法 （IEC） 离子相互作用 TSKgel DEAE-5PW 分辨率高，样品载量大。 TSKgel SP-5PW 阴离子交换在单克隆抗体子类及杂质的分离 TSKgel CM-5PW 与纯化中起着重要的作用。由于很多杂质不