赤腹松鼠肠道细菌分离鉴定及耐药性分析.pdfVIP

动物医学进展 。2013，34(1)：125—129 ProgressinVeterinaryMedicine 赤腹松鼠肠道细菌分离鉴定及耐药性分析 权 自芳 ，刘 丹 ，杨绍林 ，张 蕾 ，颜其贵 (1．四川农业大学动物生物技术 中心，四川雅安 625014； 2．四川农业大学动物疫病与人类健康l~JJl省重点实验室，四川雅安 625014) 摘 要：采用松鼠源肠道样品进行细菌分离培养和细菌 16SrRNA基因PCR扩增、测序分析，并进行 纸片扩散法药敏试验。结果显示，在 33只赤腹松鼠肠道 中分离出117株细菌，赤腹松 鼠肠道 内细菌类群主 要有葡萄球菌属 (金色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、松鼠葡萄球菌)、埃希菌属 (大肠埃希菌)、芽胞杆菌属 (蜡样 芽胞杆菌、Weihenstephanensis芽胞杆菌、苏云金芽胞杆菌、Samanii芽胞杆菌、枯草芽胞杆菌)、肠球菌属 (粪肠球茵)、克雷伯茵属 (肺炎克雷伯菌)、假单胞菌属 (荧光假单胞菌)、明串珠菌属 (肠膜样明串珠茵)；粪肠 球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌对大部分试验药物高度敏感，其他细菌对部分受试药物耐药。赤腹松鼠肠 道细菌种群具有多样性 ，且存在天然耐药现象。本研究为进一步研究野生动物体 内细菌携带天然耐药基 因 提供 了素材，也为森林旅游开发的安全性评估及环境保护提供 了参考。 关键词：赤腹松鼠；肠道细菌；分离鉴定 ；耐药性分析 中图分类号：$865．31 文献标识码 ：B 文章编号：1007—5038(2013)Ol一0125—05 赤腹松 鼠 (Callosciuruserythraeus)属于 啮齿 1 材料与方法 目，松 鼠科 ，栖息于热带、亚热带森林 中，以针 叶林 、 1．1 材料 混交林较为常见 ，亦可在 山崖甚至居 民点附近活动 ， 1_1．1 试验用动物 四川省某旅游景 区健康赤腹 以植物的嫩叶、果实、种子为主食 ，亦食用各种农作 松 鼠33只。 物_l】]。赤腹松鼠对林木危害严重 ，是 四川省主要 的 1．1．2 培养基及主要试剂 Tryptone (OXOID 人工林害鼠之一l2]。随着森林旅游业 的发展 ，人类 Ltd．)，YeastExtract(0X0IDLtd．)购于 Sigma公 和家畜与森林野生动物接触 的机会和强度逐渐增 司；血琼脂 、SP琼脂、DHL琼脂 、普通营养琼脂 、MH 大，赤腹松 鼠数量巨大且分布广泛 ，如果携带病原细 培养基购于北京奥博星生物技术有限公司；药敏纸 菌，将会成为家养动物及人类某些疾病 的传染来源。 片购于杭州微生物试剂有限公司；质粒小量抽提 、凝 细菌耐药已成为一个全球性 问题 ，几乎所有细菌都 胶 回收试剂盒 、Mix等购于天根生化技术有限公司； 能获得耐药基因，几乎每一种抗菌药物都能被细菌 上游引物 、下游引物购于上海英俊生物技术有 限公 中某些物质抵抗或破坏 ]，给临床细菌性疾病 的治 司。 疗带来了严峻的挑战，对人类健康构成 了严重 的威 1．2 方法 胁 ，野生动物源 的细菌的耐药性 的研究对细菌耐药 1．2．1 材料采集 采集赤腹松 鼠小肠 内容物 33 性机理的研究具有重要的意义 。 份，具体采集 、保存方法按参照文献Es]进行。 本试验 以四川省某旅游景 区的赤腹松 鼠为对 1．2．2 细菌分离纯化 挑取小肠内容物分别于血 象，对赤腹松 鼠所携带肠道细菌进行分离鉴定 ，探究 琼脂 、SP琼脂 、DHL琼脂 、普通营养琼脂划线接种 ， 是否有可致人兽患病的病原细菌及其能否危害旅游 37℃培养 48h，再根据菌落形态 、大小进行纯化培 资源的开发利用；在分离鉴定赤腹松 鼠肠道菌群的 养 。根据平板上 的菌落生长的形态、大