斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测.pdfVIP

第22卷第3期 激光生物学报 V01．22No．3 2013年6月 ACTALASERBIOLOGY Jun．2013 SINICA doi：10．3969／j．issn．1007-7146．2013．03．010 斑马鱼Fbxl5基因多克隆抗体的制备与检测 盛力翔，冯德峰，罗世锋，吴秀山，戴 国+，莫小阳+ (湖南师范大学蛋白质化学及鱼类发育生物学教育部重点实验室，心脏发育研究中心，湖南长沙410081) 摘 要：砒f5为F—box基因家族的一员，目前研究发现其与心脏的发育有关。为了在斑马鱼模型中进一步研 究该基因的功能，有必要制备其多克隆抗体。通过桥式PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Fbxl5基因片 融合蛋白。这个融合蛋白用Ni-IDA凝胶柱亲和纯化，将纯化的H／s一硒戈f5融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克 隆抗体。使用WesternBlot检测，获得了Fbxl5原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗朋石f5多克隆抗 体。随后检测了硒戈f5在斑马鱼胚胎和成体组织中蛋白的表达，通过基因芯片分析在Fbxl5一MO和Std胚胎样品 的mRNA含量差异．所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Fbxl5多克隆抗体，为Fbxl5功能的进一 步研究奠定了基础。 关键词：Fbxl5；融合蛋白；多克隆抗体；基因芯片 中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1007-7146(2013)03-0249-08 andDetectionofFbxl5FusionProteinand Preparation ofIts PreparationPolyclonalAntibody SHENG Xiushan，DAIGuo’，MO lixiang，FENGaefe增，LUOshifeng，WU Xiaoyang+ Centerfor LabofMOEfor Heart andProtein (The Development，Key DevelopmentBiology Chemistry， HunanNormal University，Changsha410081，Hunan，China) Abstract：AsamemberofF．box hasbeeninvolvedinthe ofheartthecurrentre— family．Fbxl5 gene developmentby search．In in orderto thefurtherfunctionofFbxl5 Zebrafish is to its model，it study gene necessarypreparepolyclonal antibody．The andwell ofZebrafishFbxl5wasobtained PCR hydrophilicsp