慢性HBV感染者外周血树突状细胞亚群的检测和分析.pdfVIP

维普资讯 366 (Jk海免疫学杂志)2CO1年第2l卷第6期 文章编号 ：lo0I．2478c2001]06-0366433 慢性HBV感染者外周血树突状细胞亚群的检测和分析 张宜俊 ．郑曲波．刘惠萍．刘树人，易学瑞，章咎生 (中国人 民解放军全军传染病 中心．广州 510602) 摘要：采用流式细胞术对慢性HBV感染者和健康^(抗HBs阳性)外周血树突状细胞 (DC)进行检测，并观察其变化规律 ， 为进一步了解DC与慢性HBV感染及免疫耐受的关系。结果表明，慢性HBV感染者外周血DC的CDIlc’和CDII~两个亚群 均明显低于健康人。提示DC在慢性乙型肝炎的发病过程中有重要作用，检测DC有利于进一步研究HBV感染的发病机制 和治疗方案。 关键词：乙型肝炎病毒；慢性感染 1免疫耐受；树突状细胞；外周血；流式细胞术 中图分类号 ：R512．6 文献标识码 ：A 树突状细胞 (DC)是免疫反应的始动因素，作 alog No．349043)；小 鼠 G2B PE (BD Catalog 为一类专职的抗原递呈细胞 ，它启动机体的免疫反 No．349053)；FACS溶血素：FACSMT LysingSolution 应 ，尤其在 T细胞介导的细胞免疫反应中起关键作 (10×)(BDCatalogNo．349202)，临用前用去离子水 用。因此 ，成为抗病毒免疫研究中的热点。 1：10稀释 ；洗涤液为PBS(10×)，固定液为含 1％ 在 HBV感染的患者以及 HBV转基 因小 鼠的 多聚甲醛的PBS(1×)(表 1) DC研究中．结果均显示 DC与 HBV感染的免疫耐 衰 1 实验程序 受有关lI“J。既往的研究主要是经密度梯度离心和 体外培养获得 DC，在一定程度上影响细胞的性能， 为能更确切地反映HBV感染患者体 内DC的特性， 我们采用流式细胞仪对慢性 HBV感染者进行全血 DC研究。现报道如下。 13 主要仪器 肝素钠抗凝真空采血管 (BDVA． 1 材料和方法 CUTAINER~CatalogNo ． 367673)；12×75mm有盖的 1．1 研究对象 观察组：临床确诊 的慢性 HBV感 Falcon管 (BDCatalogNo．2058)；FACSCalibur流式细 染者 64例 ．年龄 16～54岁，平均病程 5—6年。 胞仪 (美国BD公司产品)。 均肝功能正常、HBsAg、HBeAg和HBVDNA三者均 1．4 实验方法 空腹采静脉血 ，立即置肝素钠抗 阳性，半年内未用过免疫调节剂和抗病毒药物。对 凝真空采血管，轻轻摇匀 ．置室温 4h内进行流式 照组 ：健康人员 加 例，均无肝炎病史及免疫系统 细胞术检测 ．采用全血直接染色法。按上述 (表 1) 病史，肝功能正常，血清抗 HBs阳性(注射过乙肝 加抗体于 Falcon管；每管加全血 100 “l，混匀于室 疫苗)，年龄与观察组相似。 温暗处温育 15min；加2 溶血素．再经同法温育 1．2 主要试剂 用于 DC检测 的荧光标记 的单抗 10min，离心弃上清后，加清洗液混匀 ．再离心上 为 ：Lineage Coetall1 (Lin 1)FITC (BD Catalog 清，加 1％多聚甲醛固定 ，直接上流式细胞仪获取 No340546)．包 括 CD3、 CD14、CD16、CD19、