siRNA干扰骨形态发生蛋白2对肝癌SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的抑制作用.pdfVIP

第3l卷第23期 第 三 军 医 大 学 学 报 Vo1．31，No．23 2330 2009年 12月 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE Dec．2009 著 文章编号：1000-5404(2009)23—23300·4 siRNA干扰骨形态发生蛋 白2对肝癌SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的抑制作用 吴建兵，傅华群，黄龙璋 ，刘安文，张吉翔 (南昌大学第二附属医院肿瘤科，江西省重点医学分子实验室，南昌330006) 摘 要：日的 设计并化学合成针对骨形态发生蛋 白2(bonemorphogeneticproteins，BMP一2)的siRNA分子片段，转染 人肝癌SMMC7721细胞，观察其对 SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的影响。方法 设计并化学合成针对 BMP-2的3个 siRNA分子序列，阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞，运用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT—PCR)和Western印迹 法检测细胞中BMP-2在mRNA水平和蛋白水平的变化，体外侵袭实验检测转染后细胞侵袭能力的变化。实验共分6组， ①正常对照组；②空白对照组；③阴性对照组；④ ～⑥分别为 BMP一2一siRNA—A、BMP一2siRNA—B、BMP一2一siRNA—C转染组。 结果 RT—PCR和Westernblot显示3对特异性BMP一2一siRNA转染肝癌细胞SMMC7721之后，其BMP-2的基因和蛋白表达 均受到抑制，以siRNA—B抑制效果最明显[(0．32±0．07)us(0．92±0．14)，(0．37±0．10) (0．89．4-0．17)，P0．o1j。体 外侵袭实验显示转染后肝癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组 [分别为 (6．48±3．62)、(23．72±3．24)、(22．38± 3．84)，P0．05]。结论 BMP一2与肝癌的侵袭转移潜能相关，siRNA—BMP-2能明显抑制肝癌细胞SMMC7721的BMP一2表 达，从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力。 关键词：肝肿瘤；骨形态发生蛋白；RNA干扰 ；迁移；侵袭 中图法分类号：R394；R73—37；R735．7 文献标识码：A siRNA--BM P--2 inhibits m igration and invasion of human hepatoma cell line SM M C7721 wuJian—bing，FU Hua—qun，HUANG Long—zhang，LIUAn—wen，ZHANG Ji—xiang(DepartmentofOncology，KeyMedical MolecularLaboratoryofJiangxiProvince，SecondAffiliatedHospitalofNanchangUniversity，Nanchang330006，China) Abstract：Objective TodesignandpreparesiRNAstargetingbonemorphogeneticprotein2(BMP一2) geneandtoobserveitseffecton themigrationand invasionofSMMC7721cells．Methods Threespecific siRNAstargetingBMP一2weredesignedandsynthesized，andthentransientlytransfectedintoSMMC7721cells viacathodolyteliposometransfectionmethod．ReversetranscriptasePCR andWesternblottingwereusedtode— tectBMP一2expressionatmRNA andproteinlevels．Themigrationandinvasionabil