产碱性纤维素酶芽孢杆菌ZA-05的分离及功能基因克隆.pdfVIP

第 50卷第 18期 湖北 农业 科 学 Vol_50No．18 2011年 9月 HubeiAgricuhuralSciences Sep．，2011 产碱性纤维素酶芽孢杆菌ZA一05的分离及 功能基因克隆 魏艳丽 ，李红梅，李纪顺，扈进冬 ，杨合 同 (山东省科学院生物研究所／山东省应用微生物重点实验垂，济南 250014) 摘要 ：从造纸污泥中分离到一株芽孢杆茵ZA—O5，该菌可产生 内切 B一1，4一葡聚糖酶酶活性 ，且在碱性条 件下酶活较高，经生理生化和分子生物学鉴定，该菌株为淀粉液化芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)； 根据 GenBank登录的内切一B一1，4一葡聚糖酶基因(DQ782954．1，M28332．1，AY859492．1)的同源性序列， 利用 PCR方法克 隆到该菌株的功能基 因．并对其进行测序。测序结果显示其全长为 1500bp，推测其含 499个氨基 酸 关键词 ：淀粉液化芽孢杆菌 ：分离鉴定 ：碱性纤维素酶 ；基 因克隆 中图分类号：Q939．124 文献标识码：A 文章编号：0439—8114(2011)18—3859—04 Isolation and FunctionalGeneCloning ofAlkaline GlucanaseProducing Bacillus Strain ZA-05 WEIYan-li，LIHong-mei，LIJi-shun，HU Jin—dong，YANG He—tong (BioteehnologyCemerofShandongAcademyofSciences／KeyLaboratoq ofAppliedMicrohiolo~ ofShandongProvince，]inan250014，China) Abstract：AnalkalineglucanaseproducingstrainZA-05whichhadtheenzymeactivityofendo—B一1，4-glucanasewasiso‘ latedfrompapermillsludgebyCongo—redstainingmethod．ItwasidentifiedasBacillusamyloliquefaciensbasedOilitsmor— phologicalcharactersand16SrDNA sequence．Accordingtothehomologoussequenceofendo一13-1，4-glucanasegene(Gen- BankNo．DQ782954．1，M28332．1，AY859492．1)，analkali-tolerantglucanasegenewasamplifiedbyPCR andthen se— quenced．The fulllength ofhtisalkali—tolerantglucanasegenewas1500bp andpresumably encoded499 amino acids． Keywords：Bacillusamyloliquefaeiens；isolationandidenti~；alkalineglucanase；DNA cloning 纤维素酶是能将纤维素水解成还原糖 的一类 效果 ，而且对衣物还具有柔软 、增艳的作用 ，其发现 酶系的总称 。主要包括内切一SI一1。4一葡聚糖酶(en． 和应用被称为洗涤剂工业的一次技术革命…。可生 d0—1．4一SI—D—glucanase，EC 3．2．1．4，EG)、纤维二糖 产碱性纤维素酶 的微生物种类很多．但用于工业化 水解酶 (exo一1，4一B—D—glucanase，EC 3．2．1．91，CBH) 生产的主要是芽孢杆菌的几个种 ，如地衣芽孢杆 和B一葡萄糖苷酶 (B一