蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

山东中医杂志2006年2月第25卷第2期 · l 17- 蟾酥胶囊含药血清诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究 顿爱社1，王 凡2，估长青2，王 勇2，郭 琼2，王 萍3 院，重庆400013) [摘要]目的：观察蟾酥胶囊含药血清对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的诱导作用。方法：采用中药血清药理学 h、48 方法，选择不同浓度含药血清作为实验组，分别与人肝癌BEL-7402细胞共同孵育24h，显微镜下观察细胞形 态学变化；锥虫蓝染色检测细胞蓝染率；流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞周期变化及APO2．7蛋白的阳性表达 率；均与10％无药血清组做对照。结果：实验组部分细胞变小、变圆，贴壁能力明显下降，呈漂浮状态，集落性明显 降低，呈单个生长状态；锥虫蓝染色显示，细胞蓝染率无明显变化；流式细胞仪检测，可见明显的凋亡峰，细胞周期 中G，、S期下降，G。／M期升高，APO2．7蛋白表达的阳性峰明显增高，细胞凋亡率与作用时间、含药血清浓度呈一 定的时效和量效关系。结论：蟾酥胶囊可以诱导人肝癌细胞BEL-7402凋亡。 [关键词]蟾酥胶囊；含药血清；肝癌；细胞凋亡 [中图分类号]R285．5[文献标识码]A [文章编号]0257—358X(2006)02—0117—04 肿瘤的发生不仅与细胞过度增殖有关，也与细 实验3组：加30％含药血清。 胞凋亡减少有关，一旦细胞凋亡受到抑制，即可导致 1．3 细胞培养及诱导 人肝癌BEL一7402细胞株： 肿瘤的发生、发展和恶化[1]。若能抑制肿瘤细胞的 购自华西临床医学院移植与免疫实验室。细胞株用 增殖并诱导其凋亡，肿瘤细胞就有可能停止生长，因 含10％小牛血清的RPMI1640培养液常规培养， 而，诱导肿瘤细胞凋亡已成为很有希望的治疗肿瘤 至对数生长期，消化收集，分别用含10％无药血清， 的新途径之一[2]。蟾酥胶囊(chansucapsule)由重10％、20％、30％含药血清的RPMI1640培养液重 庆市中医研究院研制，以蟾酥为主要成分，研究发现 悬调整，以1×105／ml接种于培养瓶，培养24h、 其具有抑制动物肿瘤及促进动物免疫功能的作用， 48 h后用于各项实验检测。 本实验旨在进一步观察蟾酥胶囊含药血清对体外培 1．4．细胞形态学观察倒置显微镜下观察对照组 养人肝癌BEL一7402细胞凋亡的诱导作用。 及各实验组细胞形态学变化情况。 1 材料与方法 1．5锥虫蓝染色测定细胞蓝染率常规消化，适当 1．1 含药血清的制备 蟾酥胶囊水溶液(1：1)由培养液重悬，调整密度为105／ml。取细胞悬液 重庆市中医研究院提供。参考文献[3]方法并作改 0．2 M ml+0．4％锥虫蓝溶液(0．01PBS配制) 进，20只新西兰大白兔(2．0～2．5kg)随机分组， 0．5ml+培养液0．3ml，充分混匀。将混合液放置 每组10只，分别用于制备含药血清和无药血清。 5～15 min，用毛细吸管或1ml注射器吸取少量混 含药血清制备组给予蟾酥胶囊水溶液每日6ml／kg 合液注入血球计数板小室。镜下至少计数500个细 体重剂量灌胃，无药血清制备组给予等剂量的生理 胞，并计数其中着色细胞。计算各组细胞蓝染率：细 h 盐水灌胃，日2次，连续3d，于最后一次灌胃1 胞蓝染率(％)一着色细胞数÷细胞总数×100％。 后，心脏穿刺抽血，4℃冰箱过夜，离心，无