辐射致人正常肝细胞蛋白质组电泳图谱的改变.pdfVIP

第29卷 第6期 辐射 防 护 VoL 29 No．6 2009年 11月 RadiationProtection NOV． 2oo9 辐射致人正常肝细胞蛋 白质组电泳 图谱的改变 王 放 左雅慧 王小莉 郭华平 李建国 王仲文 (1．中国辐射防护研究院，太原，030006；2．中国原子能科学研究院，北京，102413) 摘 要 利用蛋白质组学技术对0．5和2Gy 射线照射后4小时人正常肝细胞的蛋白质的变化进行了 初步探讨。研究结果表明：与对照组相 比，0．5Gy处理组中，照射后4h差异蛋白点数为 146个 ，其中表 达上调的蛋白67个，表达下调的蛋白79个；2Gy处理组中，照射后4h差异蛋 白点数为 127个 ，其中表 达上调的蛋白83个，表达下调的蛋白44个。0．5Gy和2Gy处理组共同差异表达的蛋 白点数56个，其 中，表达上调的39个，表达下调的17个。肽质量指纹图谱分析结果显示共同表达的差异蛋白有热休克 蛋白、胞内氯离子通道蛋白以及核磷蛋 白等。 关键词 辐射 人肝细胞 蛋 白质组 差异表达蛋 白 双向电泳技术是当前分离复杂蛋白混合物 1 材料和方法 的有效方法之一，用于多种器官、组织和细胞的 1．1 细胞株 高通量蛋白质的分离、分析和鉴定。分析全蛋 人正常肝细胞7702，本室保存。 白表达的差异变化 已成为蛋 白质组学研究的一 1．2 细胞培养 个重要手段。目前，质谱与双向电泳的有机结 RPMI1640培养基 中加入 20％小牛血清、 合广泛应用于蛋白质组研究中蛋 白质的鉴定。 109U／mL青霉素和 100I~g／mL链霉素，并用 利用蛋白质组学技术筛选辐射损伤的差异 NaHCO 调 pH至7．2。将细胞置于37oC、5％ 蛋 白研究一直是国内外放射生物学领域的一个 CO：条件下恒温培养，贴壁生长，至对数生长期 热点，但多集中在啮齿类动物，如小鼠肠上皮细 进行实验。 胞 J、。肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 和大鼠淋 巴细 1．3 细胞照射 胞 等，有关肝脏细胞的研究鲜有报道。肝脏 本院附属医院∞Co照射源。取对数生长期 是人体最为重要的脏器之一，承担着极其重要 7702细胞，将其分为0、0．5、2Gy三个剂量组， 的生理生化功能，其本身的基因调控网络也极 其中0Gy为对照组。冰浴条件下进行 射线 为复杂 j。电离辐射可引起肝功能以及肝脏 一 次照射，照射剂量率0．53Gy／min。 酶学的改变，但肝脏损伤的作用机制 尚未明确 。 本研究应用蛋白质组学技术分别对不同剂量 ^y 1．4 蛋 白质样品的制备 射线照射后人正常肝细胞的蛋 白质组的变化进 于照射后 4h用细胞刮子刮取贴壁细胞 ， 行了检测，并对其发生机制进行了初步的探讨， 加入生理盐水后，于 1000r／min离心5min，弃 该项结果为肝脏辐射损伤的分子机制研究提供 上清液 。该步骤重复3次。离心后收集的细胞 了实验基础。 加入适量的裂解液 (7mol／L尿素，2mol／L硫