杜氏盐藻CDPK基因的克隆及其序列的分析.pdfVIP

23 卷 9 期 草 　业 　科 　学 51　　　 Vol23 ,No9 PRA TA CUL TU RAL SCIEN CE 9/ 2006 杜氏盐藻 CD P K 基因的克隆及其序列的分析 1 1 1 1 2 3 段金秀 ,郭 丽 ,曹致中 ,张向东 ,王小行 ,郭蜀光 ( 1 甘肃农业大学草业学院 , 甘肃 兰州 730070 ; 2 四川川大光耀生物工程有限公司 , 四川 成都 6 10063 ; 3 河南师范大学生命科学学院 ,河南 新乡 453002) 摘要 :首先对拟南芥 A rabi dop s is t hal i ana 等其他物种 CD P K 基因的同源序列进行相似性分析 ,设计 1 对简 并引物 ,利用 R TPCR 技术获得一个长 636 bp 的片段 ,经克隆测序分析发现其同拟南芥的 CD P K 基因有 603 %的相似性 ,然后再以此片段为模板设计引物 ,通过 RA CE 技术构建杜氏盐藻 D unal iel l a s al i na CD P K 基因的全长序列 。在 GenBank 中进行 Blastp 检索 ,发现该片段与许多植物 CD P K 基因具有较高的相似性 (502 %～730 %) 。 关键词 : 同源克隆;简并引物 ;钙依赖蛋白激酶 ;RA CE 中图分类号 :Q9432 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :100 10629 (2006) 09005 105 ( 　钙依赖蛋 白激酶 CalciumDep endent Pro 海洋中 ,可在 0 1～55 mol/ L 的 N aCl 溶液下生 t ein Kina se/ Calmo dulinlike Do main Prot ein Ki 存 ,是研究植物耐盐机理的一个好的模式物种 。 ) 试验 目的是把杜氏盐藻的钙依赖蛋白激酶基因进 na se ,CD P K 是植物和一些原生生物所特有的一 类丝氨酸/ 苏氨酸型蛋白激酶 ,可以不经钙调素的 行全长克隆 ,为下一步将该基因转入其他生物 ,分 作用而直接被钙信号激活 。典型的 CD P K 分子 析它在逆境和正常环境下的表达差异 ,为是否能 量为 45～72 kD , 由 1 条多肽链组成 , 已经确证在 够提高生物的抗逆性奠定基础 。 植物 、藻类和一些原生生物中存在 ,但在酵母和高 1 　材料与方法 等动物中尚未发现[ 1 ] 。它参与植物防卫反应中抗 1 1 材料 性基因的激活[2 ] ,参与性器官发育和种子发育的 1 1 1 藻种 、工程菌和克隆载体 　杜氏盐藻和大 不同阶段[3 ,4 ] ,可以磷酸化多种蛋 白, 如 PAL 激 肠杆菌 TO P 10 由川大光耀生物工程有限公司保 [ 5 ] ( 酶 、肌动蛋 白解 聚因子 actindep olymeri sing ( 存 , 克 隆载体为 T/ A 克 隆载体 购 自 Takara )