新型抗体偶联胶原包被质粒DNA血管支架的研制.pdfVIP

维普资讯 中 国 医 学 科 学 院 学 报 ACTA ACADEMIAEMEDICINAE SINICAE · 论 著 · 新型抗体偶联胶原包被质粒 DNA血管支架的研制△ 金 旭，冷希岗，刘兰霞，谷海刚，张 超，王 海，宋存先# (中国医学科学院 中国协和医科大学 生物医学工程研究所生物医学材料重点实验室，天津300192) 摘要 ：目的 研制一种以支架为基础的高效、局部定位的新型基因投递体系。方法 利用双官能偶联剂N-琥珀 酰亚胺基 3．(2-吡啶二硫基)丙酸酯 (SPDP)将支架表面涂布的胶原与抗DNA抗体化学键合，该抗体再与质粒 DNA (pEGFP．C1)免疫结合，并加入阳离子脂质体提高细胞转染效率。用 I标记抗DNA抗体，检测支架表面偶联的抗体 量。用 P标记pEGFP．C1检测通过上述方法结合在支架上的DNA量，同时以物理吸附组作为对照，通过细胞培养和兔 体 内实验验证其效果。结果 实验组胶原基质携带抗体量约为对照组的l5倍 (P0．005)。实验组胶原基质携带质粒 DNA量显著高于对照组 (P0．O1)，释放时间达 13d以上。细胞转染实验结果表明，抗DNA抗体连结pEGFP．C1质粒 组支架胶原涂层表面有较多GFP转染阳性细胞生长 ，而未与支架接触的周边细胞几乎无转染。动物实验结果显示约有 (2．8±0．7)％血管壁细胞被转染，新生内膜转染率最高，达7％，远隔器官未见载体扩散。结论 抗体偶联胶原包被质 粒DNA血管支架是一种新型高效、局部定位的基因转染体系。该体系适用于多种基因转染 ，且基因释放在一定条件下 可控，为开发心血管内靶向基因投递体系提供了新思路。 关键词：基因治疗；载体；抗体；支架；质粒；胶原 中图分类号：R3l8 文献标识码：A 文章编号：1000-503X(2006)05．0665．05 A NovelAnti-DNA AntibodyM odifiedCoronaryStentforSite-specific PlasmidDNA Delivery△ JINXu，LENG Xi-gang，LIU Lan-xia，GU Hai-gang，ZHANGChao，WANG Hai，SONGCun—xina (KeyLaboratoryofBiomaterialsofTianjin，InstituteofBiomedicalEngineering，CAMSandPUMC，Tianjin300192，China) ABSTRACT：Objective Toexplorethefeasibilityofusinganendovascularmetalstentasahighlyeffi． cientandsite—specificgenedeliverysystem．M ethods Stentswereformulatedwithacollagencoating．Anti． DNA monoclonal antibodieswerecovalentlyboundtothecollagensurfacebyacrosslinkingreagentofN．．SUC．． cinimidyl3-(2-pyridyldithio)propionate (SPDP)．Bindingcapacityandstabilityofnatibodyandplasmid DNA onstentswerequantifiedbyradioactivelabeling．rrIlegenetransductionefficiencywasevaluatedincell cultureandinrabbits．Results Theamountofantibodiesbindingon