紫外分光光度法测定IL-2靶向5-FURP脂质体中IL-2的含量.pdfVIP

紫外分光光度法测定IL一2靶向5一FURP脂质体中IL一2的含量 吴镁春 ，赵 胎，曾 里，王 驰 (重庆医科大学药学院，重庆市 400016) 中图分类号 R927．2 文献标识码 A 文章编号 1001—0408(2009)34—270102 摘 要 目的：建立测定白细胞介素一2(IL一2)靶向5一氟尿苷棕榈酸酯前药(5一FURP)脂质体中IL一2含量的方法。方法：在 样品溶液中加入考马斯亮蓝G～250溶液染色，以空白脂质体为空白，在 595nm波长处照分光光度法测定 IL一2的吸光度，并计 算含量。结果：IL 2检测浓度的线性范围为 1～100 g·mL (r：0．9997)；平均回收率为 99．26％，RSD=0．59％(=5)。结 论 ：本方法操作简便、快速、检测灵敏、重复性好 ，可用于该脂质体 中IL一2的含量测定。 关键词 白细胞介素一2；考马斯亮蓝G一250；5一氟尿苷棕榈酸酯前药；含量测定 DeterminationofIL—。2ContentinIL —。2Targeting5—。FURP LiposomesbyUltravioletSpectrophotometry wU Mei—chun，ZHAOYi，ZENG Li，WANGChi(CollegeofPharmacy，ChongqingMedicalUniversity， Chongqing400016，China) ABSTRACT 0BJECTIVE：TodeterminethecontentofIL一2inIL一2targetingliposomesof5一FURP．METHODS：The samplesolutionwasstainedbyCoomassiebrillantblueG 250solution．Usingblankliposomeasblank．theabsorbabilityofthe IL 一2wasdeterminedbyultravioletspectrophotometryatawavelengthof595nm：meanwhileitscontentwasdetermined． RESULTS：TheIinearrangeofIL一2wasl～100szg ·mII1(r=0．9997)andtheaveragerecoveryratewas99．26％ (RSD= 0．59％， =5)．CONCLUSION：ThemethodwasprovedtObesimple，rapid，sensitiveandreproducible，anditisapplicable forthedeterminationofIL一2inliposomeof5一FURP． KEYW oRDS IL一2；CoomassiebrillantblueG 一250；5 一palmitoyl一5～fluorouridineprodrug；Contentdetermination 白细胞介素一2(Interleukin一2，IL 2)为含有 133个氨 2 方法与结果 基酸的糖蛋 白，重组的IL一2没有经过糖基化，本试验使用的 2．1 溶液 的制备 是基因重组人 IL一2，分子量为 15420。将 自制的抑制急性排 2．1．1 对照品溶液 ：精密称取 IL一2对照品0．5mg，置于 5 斥反应药物5一氟尿苷棕榈酸酯前药 (5 palmitoyl一5一fluo— mL容量瓶中，加磷酸盐缓冲液 (PBS)溶解并稀释到刻度，制成 rouridineprodrug，5一FURP)包裹在脂质体里，利用交联剂将 浓度为 0．1mg ·mL。的溶液 ，即得。 脂质体与 IL一2上结合 ，形成 IL 2靶向的5一FURP脂质 2．1．2 供试品溶液：将大豆卵磷脂、胆固醇等溶于氯仿中，转 体。IL～2作为靶头可与在HIV感染、癌症、实质器官移植排 入圆底烧瓶蒸发成膜。将 5一FURP溶于氯仿 ，复溶脂质膜，再 斥反应及关节炎等中有高表达的IL一2受体结合，从而降低药 加入 PBS，继续旋转蒸发直至形成均匀混悬的脂质体。取 5 物的毒副作用，提高药物的选择性和生物利用度。目前测定 FURP脂质体加入 25％的戊二醛 后再加入 0．1mg·mL IL一2含量常采用的方法为酶联免疫吸附法(ELISA) “】，该法 的