水蛭提取物对肝癌HepG2细胞DNA去甲基化作用研究.pdfVIP

湖 南 中 医 药 大 学 学 报 2011年9月第 3l卷第 9期 8 JournalofTCM UIliv．0fHunan Sep．2011Vo1．31No．9 · 中药药理 · 水蛭提取物对肝癌 HepG2细胞 DNA 去甲基化作用研究 田雪飞 ，孙 婧 ，方 圆 ，伍参荣 ，周 青 ，廖兴华 (1．湖南 中医药大学 中西医结合学院，湖南 长沙 410208；2．湖南 中医药大学基础医学院，湖南 长沙 410208： 3．湖南 中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007) [摘要] 目的 探讨水蛭提取物对肝癌 HepG2细胞 DNA 甲基转移酶 (DNMTs)表达的抑制作用。方法 采用 M1Tr 法检测水蛭提取物对肝癌 HepG2细胞的增殖抑制作用，根据回归方程计算 出半数抑制浓度 (IC5D)。以 1／2IC∞合药量 的水蛭提取物处理肝癌HepG2细胞 ，并 以5一脱氧杂氮胞苷 (5一Aza—cdR)处理作 阳性对照 ，处理72h时采用逆转录一 聚合酶链反应 (RT—PCR)、免疫组化等方法检测肝癌 HepG2细胞 DNMT1、DNMT3a、DNMT13bmRNA及 蛋 白表达水 平 。结果 肝癌 HepG2细胞 DNMT1呈高表达 ，DNMT3a、DNMT3b呈 中低度表达 。经水蛭提取物处理后肝癌 HeDG2细 胞 DNMT1、DNMT3a表达水平 明显下降，DNMT3b基本不表达 ，与空 白对照组比较差异有统计学意义(尸O．01)．与5一 Aza-cdR组 比较 ，水蛭提取物组降低 DNMT1作用弱于5一Aza—cdR，降低 DNMT3a、DNMT3b作用明显优于5一Aza—cdR 组 (P0．05)。结论 水蛭提取物能抑制肝癌HepG2细胞 DNTMs表达，参与DNA去 甲基化作用可能是水蛭抗肿瘤的 机制之一 。 (关键词]肝癌 ；水蛭 ；DNA 甲基转移酶；HepG2细胞 (中图分类号]R285．5 [文献标识码]A [文章编号]doi：10．3969~．issn．1674—070X．2011．09．002．008．04 Study ofLeech extracton DNA demethylation in HepG2 TIAN Xue-fei，SUN Jing，FANG Yuan，WU Can-rong，ZHOUQing，LIAO Xing-hua (TCM UniversityofHunan，Changsha，Hunan410208，China) [Abstract]Objective To investigate the inhibition ofleech extracton expression of DNA methyhransfer fDNMTs1genesofHepG2 cells．Methods The inhibition and proliferation of leech extract for HepG2 ceils were determinated with MTF methods．The IC50 concentration was calculated with the regression equation．The 1／2 madicated volume of IC5l1wasused to treat theHepG2 cellsand the 5一Aza—edR todoasapositivecontrol，and then，the DNMTl，DNMT3a， DNMT3b mRNA and protein expressions ofHepG2 cellswere detected with RT—PCR and im． munohistoehemistry methods after72 h．Results Th e HepG2 cellswere in higher expre