一种提取荒漠拟步甲昆虫基因组DNA的新方法.pdfVIP

第26卷 第4期 干 旱 区 研 究 Vo1．26 No．4 2009年7月 ARID Z0NE RESEARCH July 2009 文章编号： 1001—4675(2009)04—0582—04 一 种提取荒漠拟步 甲昆虫基因组 DNA的新方法 刘 璇 ， 张富春 ， 马 纪 (新疆大学生命科学与技术学院 新疆生物资源基因工程重点实验室，新疆 乌鲁木齐 830046) 摘 要：昆虫基因组DNA的提取是研究昆虫功能基因的关键环节。一些荒漠昆虫个体较小，不易除去的外壳会造 成多糖污染，用普通动物组织DNA提取方法效果不佳。通过紫外分光光度测定、凝胶电泳检测 、PCR反应及限制 性酶切分析表明，CTAB—NaC1法是一种适用于拟步甲科小个体昆虫提取基因组 DNA的好方法，蛋 白质 、多糖及 RNA影响很低，完全能够满足后续DNA研究的需求。与传统方法相比简便快速 ，且成本低，尤其适用于拟步甲科 昆虫DNA的分离。 关键词：拟步 甲科 昆虫；DNA提取；CTAB—NaC1法；分子生物学 中图分类号：Q969．48 文献标识码：A 拟步甲科昆虫是荒漠地区昆虫区系的重要组成 拟步甲科昆虫基因组DNA分离的方法。 部分，被称为沙漠的 “典型宿主”和土壤沙化程度轻 重的 “指示虫类”¨。土栖拟步 甲昆虫成虫生活在 1 材料与方法 地面，啃食植物 ；幼虫生活在地下，危害植物根部。 1．1 昆虫的采集 多数荒漠拟步甲昆虫以取食植物的根、发芽的种子 选取5种中小个体的鞘翅 目拟步 甲科昆虫为试 和叶等为主，对荒漠草地构成严重危害，甚至进入荒 漠周边的农 田 ]，成为仅次于蝗虫的危害天然牧草 虫，其 中小胸鳖 甲(Microderapunctipennis)、光滑鳖 甲(Anatolicapolita)、异长足漠 甲(Adesmiaanomala) 的害虫 I4。近年来，分子生物学技术在昆虫研究 和光滑胖漠 甲(Trigonoscelissublaevigata)采 自新疆 中的应用发展迅速，如利用 RAPD(随机扩增多态 DNA技术)、RFLP(限制性片段长度多态性技术)及 古尔班通古特沙漠的北沙窝，而黄粉 甲虫(Tenebrio molitor)为室内人工饲养，作为对照组。实验前使昆 DNA指纹技术对 昆虫进行物种分类及系统发育的 研究 ]。所有这些研究都是要获得高质量的DNA。 虫饥饿24h，然后用蒸馏水清洗虫体，用吸水纸吸干 因此，寻求简便、快速、有效的野生拟步甲昆虫基因 表面的水分后，测定每只昆虫的体重。 组DNA的提取方法，对于开展新疆荒漠拟步 甲昆虫 1．2 昆虫基因组的提取 分子生物学相关研究具有重要的意义。 在 1．5ⅡlL离心管中加入500 LCTAB提取液 目前 ，关于昆虫基因组 DNA的提取方法 已有多 [2％CTAB(ⅡV)，100mmol／LTris—HC1(pH = 种报道 ，主要有盐析提取法、有机溶剂提取法、CTAB 8．0)，20mmol／LEDTA(pH=8．0)，1％PVP]和20 法以及 SDS一蛋 白酶K法等 ，但是对于鞘翅 目 IxLB一巯基乙醇，置于65c(=水浴锅中预热；取一只 含有几丁质外壳，且个体较小的甲虫来说，如何从单 昆虫样品放人液氮中充分研磨，并将粉末转至预热 个虫体 内获得高得率、高质量的基因组DNA，避免 的离心管中，立即置于 65℃水浴锅 中孵育45—6