RNA干扰沉默人血管平滑肌细胞胱抑素C基因表达及对组织蛋白酶S表达的影响.pdfVIP

第47 卷 第7 期 山 东 大 学 学 报 医 学 版 2009 年7 月 Vol.47 No.7 JOURNAL OF SHANDONGUNIVERSITY HEALTH SCIENCES Jul. 2009 文章编号:1671 - 7554 2009 07 - 0049- 05 RNA 干 扰 沉 默 人 血 管 平 滑 肌 细 胞 胱 抑 素 C 基 因 表 达 及 对 组 织 蛋 白 酶 S 表 达 的 影 响 1 1 2 1 1 1 1 1 刘玉胜 ,鹿庆华 ,王群 ,蒋卫东 ,盛林 ,杜贻萌 ,郝林 ,王光允 山东大学 1. 第二医院心内科,济南 250033; 2. 校医院 , 济南 250100 摘要:目的 研究小干扰 RNA siRNA 对胱抑素 C CysC 基因 表达的 抑制 作用及 对组 织蛋白 酶 S CatS 表达的 影 响 。方法 利用Ambion 公司设计合成的以CysC 为靶 标的 siRNA ,通过 脂质体转 染人血 管平滑 肌细胞 VSMC ,以 未转染siRNA 细胞和转染无关 siRNA 细胞为对照 ,采用RT2PCR 和 Western blot 分别检测CysC 在mRNA 水平和蛋白 水平的改变 。选取抑制效率最高siRNA 转染VSMC ,以空白对照组 、 无关 干扰组和 CysC 高表达 组为对照 ,采用 RT2 PCR 法和Western blot 分别检测CatS 在mRNA 水平和蛋白水平的改变 。结果 转染24 h 后,siRNA 组CysC mRNA 和 蛋白表达均被有效抑制,与空白对照 组相比 ,差异 有统计 学意义 P 0.01 ,其中,siRNA2 的 抑制 效率最 高 。CatS 的mRNA 及蛋白表达水平在 siRNA 组均有明显升高 ,与其他三组比较,差异有统计学意义 P0.01 。结论 体外 转录合成的siRNA 可有效抑制人VSMC 中CysC 的表达 ,并对CatS 基因表达有一定影响 。 关键词:基因表达;胱抑素C;组织蛋白酶S;血管平滑 肌细 胞 中图分类号:R541.4 文献标志码:A siRNA inhibits expressionof Cystatin C in human vascular smooth muscle cells and effects expressionof Cathepsin S 1 1 2 1 1 LIU Yu2sheng , LU Qing2hua , WANGQun ,JIANGWei2dong , SHENGLin , 1 1 1 DU Yi2meng , HAOLin , WANG Guang2yun 1. Department of Cardiology, Second Hospital of Shandong University,Jinan 250033, China; 2. ShandongUniversity Hospital ,Jinan 250100, China Abstract: Objective To evaluate the effect of small interference RNA siRNA on Cystatin C in human vascular smoothmuscle cells and its effect on expressionof Cathepsin S. Methods siRNAtargeting Cystatin C was constructed by an online design of Ambion company and transfected into human vascular smooth muscle cells. The non2transfected cells and cells treated with the control siRNA served as controls. mRNA and protein expressionsof Cystatin C were detected by RT2PCR and Western blot re2 spectively. Compared with the non2transfected cells, cellstreatedwith control siRNAand cells highly expressing Cystatin C , the mRNA and protein expressionsof Cathepsin