二氮嗪抑制癫痫大鼠海马神经元凋亡的研究.pdfVIP

第 卷 第 期 山 东 大 学 学 报 医 学 版 年 月. . . 文章编号:? ? ? 二氮嗪抑制癫痫大鼠海马神经元凋亡的研究 孙锡波一,韩玉香 ,程蕊 ,韩涛 ,王雪 ,赵秀鹤 ,刘学伍 ,迟兆富.山东大学齐鲁医院神经内科,济南 ; .潍坊医学院附属益都中心医院神经内科,山东青州摘要:目的 观察线粒体敏感性钾离子通道 开放剂二氮嗪 对氯化锂一匹鲁卡品致痫大 鼠海马神经元线粒体凋亡通路相关凋亡因子的影响,探讨 对癫痫大鼠神经保护作用的机制。方法 采用腹腔 注射的方法,建立氯化锂一匹鲁卡品 诱导的大鼠癫痫持续状态模型。在检测大鼠海马凋亡相关蛋白 水平变化时分为对照组, 后 、 、 组;在检测 对海马神经元保护作用时分为对照组、致痫 组 组 、 预处理组 组 、 羟基癸酸 预处理组 组 。 后分 别在相应时间点灌注取脑,采用 法检测细胞的凋亡;采用法检测大鼠海马 一 、 、活性 半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶一一 蛋白的水平及细胞色素 由线粒体到胞浆的释放。结果 与正常对照组比较, 组大鼠在 后各相应时间点 染色阳性细胞明显增加. ,海马 . 蛋 白、线粒体中的细胞色素? 的表达显著降低.,海马 、活性 蛋白及胞浆中的细 胞色素 的表达明显增高.。与组及组比较,组降低的 海马 蛋白水平显著升高 . ,而升高的海马 、活性 一 蛋白的水平明显降低. , 由线粒体到胞浆的释放减少 . , 染色阳性细胞明显减少.。 的保护作用能被阻断。结论可通过上调 / 水平,减少 的释放,抑制 一 的激活,从而通过线粒体凋 亡通路抑制氯化锂一匹鲁卡品致痫大鼠 后海马神经元的凋亡,对癫痫发作所致的脑损伤具有神经保护作用, 为癫痫的神经保护治疗提供新的治疗靶点。 关键词:线粒体敏感性钾通道;二氮嗪;癫痫;细胞凋亡;大鼠, 中图分类号: . 文献标志码: ?,. ,, ,, ? 。 ?, ? 。 ,., , , ; . ,,, , , :, ? , ? ? .. ? . ?, ,,, . ,,, , .. ?一 , , 一 .,收稿日期: 作者简介:孙锡波 一 ,男,主治医师,博士研究生,主要从事癫痫与脑血管病学的研究。 ‘ :. 通讯作者:迟兆富 一 ,男,教授,博士研究生导师,主要从事癫痫的研究。 ? : . . 刘学伍 一 ,男,教授,硕士研究生导师,主要从事癫痫与脑血管病学的研究。 : . 孙锡波,等.二氮嗪抑制癫痫大鼠海马神经元凋亡的研究? ,,..一 ? ,,.., 一? , ,. . . , 一., 一.. ? ..? ...? ? 一 /,一 ,. .:? ;;;; ,二氮嗪 ,作为线粒体敏感 均购自美国 公司; 试剂盒为德国 性钾离子通道?? 公司产品;兔抗大鼠 . 多克隆抗体、兔抗 , 特异性开放剂 ,对神经 大鼠 多克隆抗体、兔抗大鼠 多克隆抗体均 系统的缺血再灌注损伤具有神经保护作用 。然 为美国 公司产品;兔抗大鼠活性 而, 对癫痫发作后导致的神经元损伤是否具有 多克隆抗体为美国公司产品; 神经保护作用,目前研究还很少。我们先前的研究 辣根过氧化物酶标记的羊抗兔多克隆抗体为美国 已证实, 能减轻氯化锂~匹鲁卡品致痫大鼠癫 公司产品;光学显微镜为日本痫发作后海马神经元的氧化应激损伤 。组织的 公司产品;数字凝胶成像系统 氧化应激损伤可触发细胞凋亡 。本研究采用氯 为美国公司产品。 化锂一匹鲁卡品制作大鼠颞叶癫痫持续状态 . 方法, 模型,用 及特异性阻 . . 药物干预及癫痫模型建立 所有大鼠腹腔 断剂 .羟基癸酸 , 预处 注射氯化锂 / ,癫痫组大鼠后给予腹 理,通过检测线粒体凋亡通路有关的蛋白、 腔注射匹鲁卡品/ ,在匹鲁卡品处理前 、细胞色素, 、活化 给予皮下注射氢溴酸东莨菪碱 / ,以拈一 的表达,并用 法检测细胞凋亡,观 抗匹鲁卡品导致的外周胆碱能反应。 预处理组 察 对癫痫发作后海马神经元凋亡的影响,并探 于注射匹鲁卡品前给予 / 腹腔内 讨其可能的神经保护机制。 注射。预处理组于注射匹鲁卡品前 先给予 / 腹腔内注射,间隔后给予 / ,腹腔内注射。对照组用 材料与方法 等量的生理盐水代替匹鲁卡品。观察大鼠的行为学 . 材料 改变,以评分标准 为依据来判定癫痫发作 . . 实验动物及分组 健康成年雄性 大 级别,发作达到Ⅳ或 级的大鼠归为实验组。如果 鼠 只,清吉级,体质量~,由山东大学实 有的小组中大鼠被排除,则即补充相应数量的大鼠, 验动物中心提供。将其中 只随机分为对照组, 以保证每组的样本量。大鼠 持续