蛋白片段互补分析技术研究进展.pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１１）：９９１０５ 蛋白片段互补分析技术研究进展 １ ２ １ 黄欣媛 　范红波 　邹礼平 （１湖北工程学院特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验室　孝感　４３２０００　２湖北职业技术学院　孝感　４３２０００） 摘要　基于报告蛋白功能重建的蛋白片段互补分析（ｐｒｏｔｅｉｎｆｒａｇｍｅｎｔｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎａｓｓａｙ，ＰＣＡ） 技术是研究体内蛋白质相互作用重要方法，可检测和分析蛋白相互作用及其时空变化和调节因 素。目前已开发出多种不同报告蛋白的ＰＣＡ系统，具有灵敏度高、信噪比高、可定量和高通量化、 适用范围广等特点。主要对ＰＣＡ的原理、不同类型及其应用领域等方面进行阐述，并展望其发展 前景。 关键词　蛋白片段互补　蛋白质相互作用　功能重建 中图分类号　Ｑ３１ 　　蛋白质是细胞活动和生命功能的体现者，胞内蛋 蛋白质Ｘ和Ｙ融合，当Ｘ和Ｙ发生相互作用时，使两 白质从不单独行动，具有联络性，必须和其他蛋白质或 个片段互补重装配，从而恢复报告蛋白的天然结构和 配体结合形成临时的或稳定的复合体以执行特定的功 功能（图１）。通过检测报告蛋白的活性即可获知目标 能。研究蛋 白质蛋 白质相互作用 （ｐｒｏｔｅｉｎｐｒｏｔｅｉｎ 蛋白Ｘ和Ｙ是否发生了相互作用。 ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ，ＰＰＩ）的技术不断建立和发展，如酵母双杂交 （Ｙ２Ｈ）、亲和层析质谱（ＡＰＭＳ）和荧光共振能量转移 （ＦＲＥＴ）技术等，揭示出细胞中大量复杂的蛋白质相互 作用。在这些技术中，蛋白片段互补分析（ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｒａｇｍｅｎｔｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎａｓｓａｙ，ＰＣＡ）技术由于能够动 图１　ＰＣＡ原理示意图 态地研究体内环境中（细胞、器官甚至活体内）的蛋白 Ｆｉｇ．１　ＳｃｈｅｍａｔｉｃｄｉａｇｒａｍｏｆＰＣＡ 质相互作用而备受关注。目前已开发出基于二氢叶酸 （ａ）Ｔｗｏｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔ（ＸａｎｄＹ）ａｒｅｅａｃｈｆｕｓｅｄｔｏＮａｎｄＣ 还原酶、内酰胺酶、荧光素酶、荧光蛋白等报告蛋白 ｔｅｒｍｉｎａｌｆｒａｇｍｅｎｔｓｏｆｒｅｐｏｒｔｅｒｐｒｏｔｅｉｎ　（ｂ）ＴｈｅｂｉｎｄｉｎｇｂｅｔｗｅｅｎＸ β 的ＰＣＡ系统，具有灵敏度高、可定量化和高通量化的优 ａｎｄＹｂｒｉｎｇｓｔｈｅｔｗｏｓｐｌｉｔｒｅｐｏｒｔｅｒｆｒａｇｍｅｎｔｓｔｏｇｅｔｈｅｒ　（ｃ）Ｔｈｅｔｗｏ ｆｒａｇｍｅｎｔｓａｒｅｉｎｃｌｏｓｅｅｎｏｕｇｈｐｒｏｘｉｍｉｔｙｔｏｒｅｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅａｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ 点，广泛应用于筛选相互作用蛋白、相互作用组学、药 ｒｅｐｏｒｔｅｒｐｒｏｔｅｉｎ 物研发等领域。 １　ＰＣＡ的原理 ２　不同类型的ＰＣＡ 　　研究表明将某些蛋白质分割成两个片段（如 Ｎ段 　　ＰＣＡ报告蛋白的活性重建应完全依赖于目标蛋白 和Ｃ段）后，这两个片段都没有活性，失去蛋白质的功 之间的相互作用，报告蛋白的两个片段不能发生自发 能。但是当他们足够靠近时，会发生特异性的非共价 互补和装配，否则会出现假阳性结果，因而报告蛋白的 ［１］ 互补并重新组装成完整蛋白质，进而恢复蛋白质的活 选择和分割方式是ＰＣＡ技术的关键 。因此，报告蛋 性。基于此，ＰＣＡ选用特定的报告蛋 白（ｒｅｐｏｒｔｅｒ 白片段和目标蛋白融合所使用的一段氨基酸ｌｉｎｋｅｒ应 ｐｒｏｔｅｉｎ），将其合理地分割为两个片段，