4个绵羊品种GDF8基因多样性检测.pdfVIP

细胞生物学杂志 ChineseJournalofCellBiology2009，31(5)：705-708 http：／／www．cjcb．org 4个绵羊品种GDF8基因多样性检测 潘 磊 王一民 石国庆 楼纪东 管 峰 (中国计量学院生命科学学院，杭州310018；临安市农业局家畜 良种推广站，临安311300；：新疆兵团绵羊繁育 生物技术重点实验室，石河子832000) 摘要 GDF8是肌肉发育的负调控因子，其功能失活会导致肌肉肥大。在特克塞尔羊中发现 GDF8基因3’UTR区的G—A突变抑制了GDF8基因的表达，造成携带突变的个体肌肉过度发育。 本实验分析了GDF8基因该突变点在道赛特羊(57只)、夏洛来羊(47只)、罗姆尼羊(38只)和湖羊 (152只)中的多样性。结果表明，供试的4个绵羊品种中未发现该位点突变的个体，推测该突变可 能与品种有关。 关键词 绵羊；GDF8；SNP；多样性 肌 肉生长抑制素(myoStain，MSTN)基因是 (40只)和上海永辉种羊场(112只)；每只羊无菌取耳 Mcpherron研究小组于 1997年采用简并引物在小鼠 组织后低温保存带回实验室，酚．氯仿抽提基因组 骨骼肌中发现的，是转化生长 因子 B(transforming DNA，TE溶解后一20℃保存备用。 growthfactorp，TGF—p)超家族成员，又称生长分化 1．2 引物及PCR扩增 因子8(growthdifferentiationfactor8，GDF8)”，主要 根据GenBank中GDF8序YlJ(DQ530260)设计引 功能为抑制肌 肉的发育，并能调节脂肪的形成 2【，。 物，引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成， 研究发现，当小 鼠的GDF8基因被敲除后，突变个体 — 匕游弓I物：5’一TTACTGTCATTGTATTCAAATCTCA一3； 的肌 肉要 比野生型个体重 2—3倍…，随后，牛的双肌 下游引物：5-CATrATAACCTAAAACTGTIGTCTI?-3。 效应也被证实是 由于GDF8基因的突变所致钔【。随 PCR扩增反应体积为2O ，其中2 l10x缓冲液，1 着研究的开展和深入，GDF8基因及其编码蛋 白序列 2．5mmol／LdNTPs，1．2山25mmol／LMgC12，各2 上 及结构都相继被探明，并发现 GDF8及其功能在多种 下游引物(1O~mol／L)，0．3 15U／a／lTaqDNA聚合酶， 脊椎动物间具有高度保守性 引【。GDF8基因的突变 2 lDNA模板，加灭菌双蒸水至20Ul；94℃预变性 可能导致其功能失活，目前已发现 GDF8基因序列中 5rain；94℃变性 35S，54℃退火 35S，72℃延伸40S， 存在多个单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymor— 32个循环；72℃延伸 5rain。 phism，SNP)位点和基因插入 ／缺失，其影响了这些脊 1．3 基因型分析及判断 椎动物的肌肉发育 【Ⅳs】。Clop等[9]在特克塞尔羊中发 取 5 lPCR产物参照内切酶HpyCH4IV使用方 现了GDF8基因3’UTR区的G—A突变，该突变抑 法添加试剂，酶切 1h后取 10 l产物，在8％聚丙烯 制了GDF8基因表达，使得携带该突变的绵羊个体表 酰胺凝胶中电泳，银染显色。PCR产物长度为326bp， 现为肌 肉肥大 。 其中野生型含有限制性内切酶HpyCH4IV的酶切位 为了探索国内部分绵羊品种资源的GDF8基因 点。因此，若酶切后获得 28bp和 298bp的片段，则 多样性并发掘肌肉发育潜能优 良的个体，为肉用绵羊 判读为野生型，表示供试羊的GD 基因在9827位 的繁殖育种提供指导，本实验对 4个绵羊品种的 的碱基为G：若酶切