VEGF靶向性siRNA表达载体的构建及其沉寂作用.pdf

2332 笠凹 堕 堂堂 (JFourthMilMedUniv)2009，30(21) http：／／www．fmmuxb．cn · 研究原著 · 文章编号：1000—2790(2009)21．2332-03 VEGF靶 向性 siRNA表达载体 的构建及其沉寂作用 李 玲 ，王风华 ，连鸿凯 ，白 玉 ，蔡朝阳 ，赵 国强 ，马俊芬 (郑州市骨科医院，郑州大学：基础医学院，第五附属医院，河南 郑州450052) Vector construction and silencing siRNA的双链寡合苷酸片断克隆到表达载体 pSupemeo，经过 酶切鉴定与测序 ，结果正确 ；稳定转染人骨肉瘤细胞系 MG-63 effectofVEGF gene targeted small 后，用RT—PCR方法检测细胞 VEGFmRNA表达水平明显降 interferingRNA 低．结论：成功构建出针对 VEGF的siRNA表达载体 pSuper— LILing一，WANG Feng —Hua ，LIAN Hong—Kai，BAIYu ，CAI neo—VEGF，转染骨肉瘤细胞后能显著降低细胞 VEGFmRNA Chao—Yang，ZHAOGuo—Qiang，MAJun—Fen 表达． Orthopedic HospitalofZhengzhou， SchoolofBasic Medical 【关键词】RAN干扰；血管内皮生长因子；骨肉瘤 Science， Fifth Affiliated Hospital， Zhengzhou University， 【中图号】R738．3 【文献标识码】A Zhengzhou450052．China 0 引言 【Abstract】AIM：ToconstructVEGFgene—targetedsmall 血管 内皮生长 因子 (vascularendothlialgrowth interferingRNA (siRNA)and itsexpressionvector；and to factor，VEGF)作为一种人属二聚蛋 白信号肽，其作 observetheexpressionlevelofitsexpressionvectorVEGFgenein 用的发挥贯穿于人类生殖、发育、组织再生和修复以 human osteosarcoma MG-63 cell transfected by the vector． METHODS：FirsttodesignVEGFgene—targetedhairpinsiRNA， 及肿瘤发生等生理、病理过程．研究资料显示 thento synthesize two complementary oligo nueleotide strand， VEGF的表达水平与肿瘤的侵袭生长明显相关．在恶 after annealing，to insertthe two—strand oligo nucleotide into 性骨肿瘤 中VEGF呈高表达 ，并与肿瘤细胞的增殖活 pSuperneovetor，whichwasthenrestrictiveenzymedigestedand 性相关．RNA干扰(RNAinterference，siRNA)是 由双 sequenced．AfterthatwetransfeetedhumanosteosarcomaMG-63 链 RNA引发的转录后基 因沉默现象，其作用机制是 celllinewith the vectorusinglipofectaminemethod．Finall