两种环境敏感高分子在相分离免疫分析中的比较研究.pdfVIP

2009年第 67卷 化 学 学 报 Vo1．67，2009 第 23期，2703~2708 AC11ACHIMICA SINICA No．23，2703~2708 · 研究论文 · 两种环境敏感高分子在相分离免疫分析中的比较研究 林 鹏木 冯建军 王艺磊 谢芳靖 王为刚 陈 芸 黄利强 (集美大学水产学院 水产科学技术与食品安全省高校重点实验室 厦门 361021) 摘要 进行了两种环境敏感高分子在相分离免疫分析嗜水气单胞菌外膜蛋I~(outermembraneprotein，OMP)中的比较研 究．首先合成温度敏感高分子聚 Ⅳ-异丙基丙烯酰胺和pH敏感高分子聚(Ⅳ_异丙基丙烯酰胺～甲基丙烯酸)，分别以Ⅳ．羟 基琥珀酰亚胺丙烯酸酯(NAs)和碳二亚胺(EDCI)作为偶联剂与抗 OMP抗体(Ab)偶联形成抗体复合物(Ab．polymer)，在 竞争型免疫测定中，OMP标准溶液与异硫氰酸荧光素标记 OMP在均相条件下竞争性地与Ab．polymer反应，调节外界 环境分离出高分子免疫复合物沉淀，重新溶解后荧光法定量，两种体系的OMP浓度均在400~3000ng／mL范围内与荧 光强度呈 良好线性关系，检出限分别为84．7和 39．6ng／mL．pH敏感高分子相比于温度敏感高分子具有以下优点：可以 在 37℃的生理温度进行免疫反应，进～步提高了免疫反应的速度和效率；可利用高分子本身的活性基团进行Ab的固 定，固定化效率、固定Ab的免疫反应活性较之NAS偶联法得到了提高；有更高的检测灵敏度．因此，pH敏感高分子更 适合于作为相分离免疫分析的载体． 关键词 免疫分析；相分离；环境敏感高分子；比较研究；外膜蛋白 ComparativeStudyofTwoEnvironment—sensitivePolymersin PhaseSeparationImmunoassay Lin，Peng Feng，Jianjun Wang，Yilei Xie，Fangjing Wang，Weigang Chen，Yun Huang，Liqiang (KeyLaboratoryofScienceandTechnologyforAquacultureandFoodSafety，FisheriesCollege， JimeiUniversity，Xiamen361021) Abstract Comparativestudyoftwoenvironment—sensitivepolymersinphaseseparationimmunoassayfor outermembraneprotein(OMP)ofAeromonashydrophilawascarriedout。Thetemperature—sensitivepoly— merpoly(N-isopropylacrylamide)andthepH—sensitivepolymerpoly(N-isopropylacrylamide—methacrylic acid)weresynthesized，andconiiugatedtotheanti—OMPantibody(Ab)toofrmtheAb—polymercomplexes withN-hydroxysuccinimidylacrylateCNAS)andN-ethyl-N~(3一dimethylaminopropy1)carbodiimidehydro— chloride(EDCI)ascouplingreagents，respectively．Ineachcompetitiveimmunoassay,thestandardOMP