半夏内生菌L3R3-1鉴定及其对植物病原菌的拮抗特性.pdfVIP

第38卷 第6期 植 物 保 护 学 报 Vo1．38 No．6 2011年 12 月 ACTA PHYTOPHYLACICA SINICA Dee． 2O11 半夏 内生菌 L3R3-1鉴定及其对植物病原菌的拮抗特性 Identificationandthecharacteristicofantagonism ofendophytic antagonisticbacteriaL3R3-1from Pinelliaternata 王剑峰 董 飞 董 丹 求东妹 肖赛琼 胡秀芳 (浙江理工大学生命科学学院，杭州 310018) WangJianfeng DongFei DongDan QiuDongmei XiaoSaiqiong HuXiufang (CollegeofLifeSciences，ZhejiangSci．TechUniversity，Hangzhou 310018，Zh@angProvince，China) 半夏 Pinelliaternata(Thunb．)Breit为天南星 nereaTGM1、葡萄座腔菌BotryosphariadothideKB由 科多年生草本半夏属植物 ，其性温、味辛，具有镇 浙江省农业科学院提供；尖孢镰刀菌Fusariumoxys— 咳祛痰、降逆止呕、消痞散结、抗心律失常、降血脂等 porumFOX由西北农林科技大学提供；腐皮镰刀菌 功效，是一种临床应用较为广泛的药用植物 J。 FusariumsolaniFOP由湖南农业科学院提供。半夏 据统计，在558种中药材中，半夏的使用频次居 22 内生菌：半夏采 自山东、浙江、安徽、甘肃、四川、贵 位，国内每年使用量达5000吨_4J。然而，以软腐病 州、江西等半夏种植地的健康和发病较轻的半夏植 为首的病害严重影响半夏的产量。目前，使用百菌 株，采集后立即带回实验室分离半夏内生菌。将半 清、多菌灵等化学农药是防治半夏病害的有效方 夏表面消毒、晾干后转入加有9mL无菌水的无菌研 法 J，但化学农药的毒性以及病原菌的抗药性等使 钵中研磨匀浆，取原液、稀释 l0倍液和 100倍液，涂 得半夏病害的防治受到一定的制约。从半夏中分离 于NA平板上，每稀释度设3个重复，平板倒置于28 高效、稳定的内生拮抗菌株已成为半夏病害防治研 o(=培养箱内培养24h，分离纯化获得纯种菌，保存于 究的热点。本试验从半夏中分离获得了1株对病原 NA斜面，置4℃冰箱中贮存备用。培养基：细菌培 菌拮抗活性较强的菌株L3R3．1，并探讨了该菌对半 养采用NA培养基，真菌培养采用PDA培养基。 夏病原菌的拮抗特性及其分类地位。 1．2生理生化鉴定：参照文献[6—7]进行。 1材料与方法 1．316SrDNA序列分析：16SrDNA序列采用通用 1．1材料：病原细菌：密执岁棍状杆菌 Clavibacter 引物fD1和rP进行扩增，PCR产物经纯化、克隆和 michiganensisCMS、胡萝 卜果胶杆菌 Pectobacterium 酶切鉴定，重组载体由上海英潍捷基生物技术有限 carotovorumpv．carotovoraECCB、青枯假单胞菌 公司测序。获得的16SrDNA基因序列与GenBank PseudomonassolanacearumRSY、假单胞杆菌Pseudo— 进行 BLAST比对，采用MEGA4．1软件 进行多序 mona$syringaeKY、核 盘菌 Sclerotiniasclerotiorum 列匹配比对及系统发育分析。 XLH由湖南农业科学学院提供；胡萝 卜果胶杆菌 1．4拮抗谱分析：采用滤纸片法和混菌法对半夏内 Pectobacteri