复合探针荧光定量PCR法检测鼠疫耶尔森氏菌的实验研究.pdfVIP

· 430 · 中国国境卫生检疫杂志2011年 12月第34卷第6期 ChineseFrontierHealthOuarantineDec．2011．V0l34．No．6 · 实 验 研 究 与疾 病 监 测 · 复合探针荧光定量PCR法检测 鼠疫耶尔森氏菌的实验研究 李禾，吴忠华，郑伟，吕沁风 浙江国际旅行卫生保健中心，浙江 杭州 310003 摘要：目的 建立用复合探针荧光定量PCR快速检测鼠疫耶尔森氏菌的方法。方法 研究根据鼠疫耶尔森氏菌p 基因的核苷酸序列设计特异引物，通过PCR法的特异性、灵敏度和重复性研究，建立了复合探针荧光定量PCR检测 鼠疫耶尔森氏菌的方法 ，用于鼠疫的筛选和诊断。结果 该检测方法的特异性为 100％，最低可检出1O个拷贝的质 粒DNA分子，可对 lxl0～lxl0拷贝范围内的模板进行定量，最低可检测至1xlOcfum／l细菌。该方法的精密度好 ，阳 性质控品和阴性质控品不同时间测定3次及同一时间5次重复实验结果cv值均5％。结论 本研究建立的复合探 针实时荧光定量PCR检测鼠疫耶尔森氏菌的方法 ，可对 鼠疫耶尔森氏菌进行快速检测、准确辨别和早期诊断，对鼠 疫的早期快速诊断具有重要意义。 关键词：复合探针；荧光定量PCR；鼠疫耶尔森氏菌 中图分类号：R516．8 文献标识码：B Research onYersiniapestisdetectionbyfluorescentquantitative PCR withcompositeprobe LIHe，WUZhong-hua，ZHENGWei，LVQin-feng ZhejiangInternationalTravelHealthcareCenter,Hangzhou，Zhejiang310003，China Abstract： Objective ToestablishfluorescentquantitativePCR assaywithcompositeprobeforYersiniapestis detection． Methods Pla genenucleotide sequencesofYersiniapestiswasused forthe design ofPCR primers． According to study the specificity，sensitivity and reproducibility ofprimersby PCR method，a composite probe fluorescentquantitativePCR assayforYersiniapestisdetection wasestablishedforscreeninganddiagnosisofplague． Results ThespecificityofcompositeprobefluorescentquantitativePCR assaywas100％．Theassaycandetectthe minimum 10copiesofplasmidDNA molecules．Accuratequantizationcanbeachievedwithtemplatesamplesdetected within 1×10-1× 10 copies．Theminimum bacteriaconcentrationcanbedetectedbytheassayreach 1×10 cfu／ m1．The assay had good precision．The positive controls and negative controlmaterialsmeasured three times at differenttimesoratthesametimerepeatthe experimentfiveti