副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素的细胞毒性研究.pdfVIP

畜牧兽医学报 2011，42(12)：1750—1755 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素 的细胞毒性研究 陈 西，王湘如，徐晓娟，郭凤娟 ，陈焕春 ，蔡旭旺 (华 中农业大学动物医学院农业微生物学 国家重点实验室 ，武汉 430070) 摘 要：本研究旨在原核表达副猪嗜血杆菌细胞致死膨胀毒素 (Cytolethaldistendingtoxin，CDT)，并作用于猪髋 动脉 内皮细胞 (Pigiliaeendothelialcells，PIEC)，以研究其细胞毒性 。根据本实验室完成 的副猪嗜血杆菌 SH0165 株 (血清 5型)全基因组序列，针对 cdtA、cdtB和cdtC基因序列设计引物，扩增的基因片段大小分别约为 681、834 和 531bp。将靶基因克隆到原核表达载体 pET28a中，再转化到E．coliBL21(DE3)，IPTG诱导表达 3h，SDS- PAGE和Westernblot检测证实表达产物以包涵体形式存在，大小分别约 36、34和 28ku。通过体外重构毒素与 PIEC细胞作用 3h，继续培养 72h观察细胞形态学变化 。结果表 明，CdtABC全毒素致 PIEC细胞膨胀 、空泡形成、 细胞凋亡等，而其他试验组变化不显著。结果提示，CDT毒素可能在细菌感染与致病中发挥着重要作用。 关键词 ：副猪嗜血杆菌；细胞致死膨胀毒素 ；毒素 ；细胞毒性 中图分类号 ：$852．61 文献标识码 ：A 文章编号 ：0366—6964(2011)12—1750—06 CytotoxicityoftheCytolethalDistendingToxin ofHaemophilusparasuis CHENXi，WANG Xiang-ru，XUXiao-juan，GUOFeng-juan，CHEN Huan-chun，CAIXu-wang (StateKeyLaboratoryofAgriculturalMicrobiology，CollegeofVeterinaryMedicine，Huazhong AgriculturalUniversity，Wuhan 430070，China) Abstract：The studywasaimedatprokaryotic expressing cytolethaldistending toxin ofHae— mophilusparasuis andactedon Pig iliacendothelia1cells (PIEC)toinvestigatetoxin effects． According to the complete genome sequenceofHaemophilusparasuisSH0165 (serovar 5)， whichfinishedbyourlaboratory，wedesignedasetofspecificprimer，thecdtA ，cdtB andcdtC genewasamplifiedbyPCR，respectively．The681，834and531bpamplifiedDNA fragmentwas cloned intopET一28aandtheexpression wereinduced in E．coliBL21 (DE3)by IPTG for3 hours．ResultsofSodium docecylsulfate—polyacrylamidegelelectrophoresis (SDS—PAGE)and W estern blotassayshowedthatthecdtA ，cdtB andcdtCgenewasexpressedintheform ofinclu— sionbodv，andtherecombinantproteinwasabout36，34and28kDa．Recombinanttoxinacted onPIEC for3hoursinvitro，andobser