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中国生物工程杂志 ChinaBiotechnology，2009，29(11)：66～69
BridgePCR，An EasyW ayfor
ConcatemerizingDNA T1aIug．sl木●
MA0Jian—ping WANGQuan-huiZHOUringFANGJingCUIYu-fang
(InstituteofRadiationMedicine，Beijing 100850，China)
Abstract InMAST(mRNAaccessiblesitetagging)，theDNAtagsfromsynthesizedlibrarywereemployed
foridentifyingmRNA accessiblesites．A largenumberoftagswereamplifiedand subclonedofrsequencingto
verifymRNA bindingprofiles．A PCR wasdesignedbyusing oneprimerwhich bridgesoverthetagterminal
sequences．InPCR reactionDNA tagfragmentswereconcatemerizedbyabridgeprimerinreactioncycles
． The
concatemerizedtagfragmentsweresubclonedandsequenced．Dozensoftheconcatemerizedsequencescontained
thousandstags．ThePCR wasasimple，effectivewaywhichforsequencingtagsinahighthroughputmanner
．
Keywords Bioreaetor Mouseembryonicstem cells Embryoidbody Cardiomyocytes Differentiati0n
Oligomucleotide tags are important in molecular
1 M ethods
biologystudysuch asforidenti~inggeneexpression，
establishingtheRNAbindingprofiles．InMAST (mRNA llhe oDN libraries consist 18nt bases random
accessiblesitetagging)，anODNlibrarywasutilizedto sequencesflanked with two defined temr inals ． And
map the accessible sites ofmRNA molecules LI]
． The therebywe desinged a PCR to concatemerize tags by
library contained 18 randomized nucleotides nested employonlyoneprimer．Theprimermatchedandannealed
betweentwo fixed
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