转ChIFN-γ基因烟草抗虫作用初步研究.pdfVIP

云南大学 学报 (自然 科学版 )，2009，31(6)：629—631 CN53一lO45／N ISSN 0258—797l Journ~ ofYunnanUniversity 转 ChlFN— 基因烟草抗虫作用初步研究 吴拥军 卜，赵德刚1,2，许文钊 ，李耀 中 ，詹寿年 (1．贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025；2．贵州省农业生物工程重点实验室，贵州 贵阳 550025； 3．教育部绿色农药与农业生物工程重点实验室，贵州 贵阳 550025) 摘要：对田间烟蚜的自然发生情况观察和抗虫试验的研究显示，转 ChlFN一 基因烟叶具有显著的抗虫效 果．为探索转基因烟草的抗虫机理，测定了叶片中烟碱含量并对植株组织进行切片染色．结果表明，烟碱含量与 对照无显著差异；转基因烟草叶片增厚，细胞致密，细胞壁增厚可能是导致抗蚜虫、抗斜纹夜蛾的最直接因素之 一 ● 关键词：ChlFN一 基因；烟草；烟碱；组织切片；抗虫机制 中图分类号：Q949．99 文献标识码 ：A 文章编号：0258—7971(2009)06—0629—03 鸡 干扰素 (Chickeninterferon—gamma， 1 材料与方法 ChlFN一 )是一类具有强大的免疫调节作用 以及 广谱抗病毒、抗细菌、抗寄生虫等作用的细胞因子． 1．1 材料 迄今为止，很多研究报道了ChlFN一 可以直接作 1．1．1 植物材料 转 ChlFN—y基因烟草与对照 用于寄生虫 ． 烟草 (Nicotiana．tabacumCV．Xanthin)种植于贵州 烟蚜是烟草上危害严重的害虫之一，通过直接 大学转基因基地大棚． 刺吸危害植株，干扰植物的光合作用，严重影响植 1．1．2 斜纹夜蛾虫 供试斜纹夜蛾幼虫于2008 物的生长发育．另外，蚜虫是烟草病毒病的传毒介 年 l0月采 自贵州省贵阳市花溪区蔬菜田． 体昆虫，传播多种烟草病毒，给烟叶生产带来很大 1．2 方法 的损失 ．斜纹夜蛾在 国内各地都有发生，是一 1．2．1 抗蚜试验 采用 自然接种法．每隔 10d观 种暴食性和杂食性害虫，对烟叶产量和品质均可造 察并记录烟草叶片蚜虫发生数量． 成严重的影响-，j． 1．2．2 抗虫试验 采摘新鲜烟草叶片，用清水反 在前期构建 ChlFN—y植物表达载体的基础 复冲洗干净，剪成直径约 9cIn的圆形放人加有 2 上 ，采用农杆菌介导法遗传转化烟草，获得24株 mL蒸馏水的9cm培养皿中、铺平．放人 5～9条饥 转基因烟草(另文报道)．其生长期内，发现虫害较 饿 2h的供试斜纹夜蛾虫，盖好平皿．室温放置 ，每 少，推测转基因烟草可能对鳞翅 目昆虫具有一定的 隔 1h观察 1次． 抗性．为验证转 ChlFN一 基因烟草在抗虫方面的 I．2．3 烟碱含量测定 采用紫外分光光度法进 作用，首次采用 田间观察及活体离体试验检测转 行 ． ChlFN一 基因烟草的抗虫性能，并初步探索了其 I．2．4 植物组织制片 取转基因烟草与对照相应 作用机理．