MNNG诱导对日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋白的影响.pdfVIP

： ： 垦 吸 防治杂志 2009年第21卷第5期 ChinJSchistoControl2009，Vo1．21，No．5 [文章编号] 1005-6661(2009)05-0378-04 · 论著 · MNNG诱导对 日本血吸虫成虫培养细胞 核仁组织区相关嗜银蛋白的影响 钟沁萍，明珍平，蒋明森 ，董惠芬 [摘要] 目的 观察 甲基硝基亚硝基胍 (MNNG)诱导后 日本血吸虫成虫培养细胞核仁组织区相关嗜银蛋 白(AgNORs) 含量的动态变化 ，探讨MNNG诱导后培养细胞 的增殖能力。方法 将 日本血吸虫成虫细胞接种于小盖玻片上，置于含 20％小牛血清附加常量抗生素的RPMI一1640常规培养基中培养 ；培养第4天，细胞随机分为实验组和对照组两组，实验组 细胞以含3 mlMNNG的常规培养基处理48h，对照组细胞则用不含 MNNG的常规培养基作相同处理。细胞经彻底清 洗后继续以常规培养基培养3周，然后换用含5％小牛血清的低血清培养基培养。MNNG处理后第 1～9周，每周取实验 组和对照组细胞采用略作修改的胶银法进行 Ag—NORs染色，光镜下观察与拍照，HPIAS．2000图像分析仪测定代表培养细 胞内Ag—NORs含量的吸光度 (A)值，并进行统计学分析。结果 培养过程中，对照组细胞着色逐渐变浅，MNNG组细胞除 在第2周时着色变浅外，其余均逐渐加深，尤其在第6周 (MNNG诱导后第5周)，细胞核呈深棕色 ，可见粗大的银染颗粒， 核仁呈黑色，并观察到分裂细胞。第 7～9周，两组细胞着色均逐渐变浅。定量分析发现，对照组细胞在培养初期Ag— NORs含量最高，随后逐渐降低；MNNG组的Ag—NORs含量在培养第 2周时稍有降低 ，随后逐渐升高；在培养第 6周即 MNNG诱导后第5周时达到高峰 ，然后又逐渐下降。结论 MNNG诱导可显著增强培养细胞的rDNA转录活性，提高细 胞的分裂增殖能力，在 MNNG诱导后第 5周细胞增殖能力最强。 [关键词] Et本血吸虫 ；培养细胞；相关嗜银蛋白；甲基硝基亚硝基胍 [中图分类号] R383．24 [文献标识码] A EffectsofN-methyl-N-nitro-N—nitr0s0guanidineonargyrophilicnucleolaror- ganizerregionassociatedproteinsinculturedcellsfrom adultSchistosomaja— pontcum ZhongQin-ping，MingZhen-ping，JiangMing—sen，DongHui-fen DepartmentofMedicalParasitologyandResearchLaboratoryof Schistosomiasis，MedicalSchoolof WuhanUniversity，Wuhan 430071，China Correspondingauthor [Abstract] Objective TostudythedynamiceffectsofN—methyl—N—nitro—N—nitrosoguanidine(MNNG)onthecontentsofargy— rophilicnucleolarorganizerregionassociatedproteins(Ag—NORs)intheculturedcellsandtheproliferationoftheculturedcells fromadultSchistosomajaponicum．Methods Theculturedcellsfrom32一dayoldS．japonicumwereinoculatedoncoverslipsand cuhuredinroutinemedium whichwasmadeupofRPMI一1640，20％ calfserum andmoderateamountofantibiotics．Atthe4th day，theculturedcellsweredividedintoatestgroup andcontrolrgoupatr