肿瘤坏死因子α对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响及其机制.pdfVIP

心 脏 杂 志 (ChinHeartJ)2009，21(5) ·621· · 基础研究 · 肿瘤坏死因子 仪对新生大鼠心肌成纤维 细胞增殖 的影响及其机制 张 杰，杨国栋，卢兹凡 (第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 ，陕西 西安 710032) 摘要 目的：探讨肿瘤坏死因子 (TNF一)刺激对新生大 鼠心肌成纤维细胞 (CFs)增殖的影响及其机制。方法： 采用消化法培养新生SD大鼠的CFs。实验分为4组 ，即5、10和2O LTNF—ot处理组及空白对照组。将 CFs培 养 36h后，用 四氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞的增殖 ；分别用半定量 RT—PCR和Westernblot技术检测在5 g／L和 10 LTNF一仅刺激下细胞周期蛋 白D1(CyclinD1mRNA及其蛋 白)表达的变化。结果：随着 TNF一浓度的增高， MTr比色法检测的A 值呈明显递增趋势，其中5、1O及 20 L组的』4 值，分别为0．417±0．011、0．622±0．015 和0．602±0．013，与对照组(0．235±0．013)相比，有显著差异 (P0．05)。RT—PCR和免疫印迹检测表明，以5 L 和 10 g／LTNF—o．／刺激 36h后 ，CyclinD1mRNA(0．706±0．113，1．698±0．135)和其蛋白(1．270±0．168，2．749± 0．170)的水平均 明显高于对照组 CyclinD1mRNA(0．192±0．039)和蛋 白(0．658-4-0．101)的表达水平 (均 P 0．O1)。结论：TNF一0【可通过上调 CyclinD1的表达促进心肌成纤维细胞增殖，这可能为应用TNF—d信号通路抑制 剂进行抗心肌纤维化治疗提供实验依据。 关键词 ：肿瘤坏死 因子一 ；心肌成纤维细胞 ；周期蛋 白D1；增殖 中图分类号 ：R392．12 文献标识码 ：A 文章编号 ：1009—7236(2009)05—621—04 EffectofTNF-0【onproliferationofratcardiacfibroblastsand itsunder- lyingmechanism 、 ZHANGJie，YANGGuo—dong，LUZi-fan (DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi’an710032， Shaanxi，China) Abstract Ain ：Toinvestigatetheeffectsoftumornecrosisfactor仅 (TNF．or．)ontheproliferationof cardiacfibroblast(CF)andtheunderlyingmechanism．METHODS：CFsofneonatalSpragueDawley ratswereisolatedbyenzymaticdissociation．CFproliferationwasmeasuredbythiazolylblue (MTY) assayandexpressionofcyclinD1wasdetectedbyRT—PCR andWesternblotting．RESULTS：MTTcolor— imetryshowedthattheA49ovalueswere0．417±0．011，0．622-4-0．015and0．602±0．013，respectivelyin the5 g／L，10 g／Land20 g／LTNF一 groups，aU significantlyhigherthanthatinthecontrolgroup (0．235±0．013，allP0．05)．Afterstimulationof5 Land10 LTNF-o【for36h，cyclinD1 wasupregulat