基于高灵敏探针海萤荧光素类似物的化学发光法检测尿微量白.pdfVIP

维普资讯 第 36卷 分析化学 (FENXIHUAXUE) 研究报告 第 1期 2008年 1月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 57～60 基于高灵敏探针海萤荧光素类似物的 化学发光法检测尿微量 白蛋 白 徐 未 魏言春 邢 达 陈群 (华南师范大学激光生命科学研究所暨激光生命科学教育部重点实验室，广州 510631) 摘 要 海萤荧光素类似物 FCLA能检测 O：并产生532nnl的化学发光，白蛋 白(HSA)能强烈增强 FCLA一 。O：化学发光 基于此，建立了一种有效、高灵敏的检测 HSA的化学发光 (CL)检测技术。在选定的最佳实验 条件下，HSA浓度与增强化学发光信号在0．34～5．5mg／L之间呈 良好的线性关系；检 出限为0．017mg／L (30-)。对比荧光光谱分析法、同步荧光扫描法及瑞利光散射法等传统方法，本方法成本低廉、灵敏度高。实 际尿样检测与临床检测结果一致 ，同时还初步探讨了HSA增敏CL的机制。 关键词 化学发光，白蛋白，海萤荧光素类似物，单态氧 1 引 言 白蛋 白(HSA)广泛存在于人血浆和尿液中。它在尿液中的含量能够预示某些疾病比如心血管疾 病、高血压、肾病血管损伤等等。因此，量化尿液中白蛋白的浓度在临床上非常重要。 目前，常使用的测量 白蛋 白的方法有 Lowry法 、电化学发光法 、分光光度法和荧光分光光度 法 以及利用瑞利光散射共振法 ’。等。这些方法存在或操作复杂或所需仪器昂贵等缺点。化学发 光方法 因其高灵敏度、操作简单等优点在分析检测中得到广泛应用。化学发光中发光试剂多用发 光氨(Lumino1)、光泽精，但尚未见用化学发光探针海萤荧光素类似物FCLA检测蛋白质的报道。FCLA 能探测单态氧并发 532nm的化学发光 ’“。 本研究 自行设计一套化学发光装置。该装置成本低 ，能高灵敏检测 白蛋 白。由此建立了一种简单、 有效、高灵敏检测 HSA的化学发光方法 。对 比荧光光谱分析法、同步荧光扫描法和瑞利光散射法等，本 方法有高的灵敏度 ，并初步分析了HSA增敏 CL的机制。 2 实验部分 2．1 试剂与仪器 白蛋白HSA购于Sigma公司，用二次蒸馏水配制成 I×10～mol／／L母液，置于0～4cc冰箱中保存 FCLA粉 末购 于 口本 TokyoKaseiKogyoCo公 司，在 充氮 气 除 氧灭 菌 的情 况 下配 制 成 1×10 mol／L标准液，密封储存在 一20cc的冰箱 中；HO：、NaC10 购于广州化学试剂厂，为分析纯试 剂；磷酸缓冲液 (PBS)：准确称取 8．5gNaC1、2．2gNa2HPO、0．2gNaHPO 溶于 1L二次蒸馏水中， HC1调 pH至7．4。尿液 由自愿者提供，收集 24h尿液由广州南方医院检测出临床结果；化学发光法测 量时按 比例稀释到测量范围内检测。化学试剂为分析纯；所有实验用水为二次蒸馏水。 自制快速喷射针管；反应池为70mmx7mm(内径)薄玻璃管；积分球(上海亿奥信息光学科技有 限公司)；MP一952光电倍增管 (PerkinElmer，USA)；pH酸度计 (Sartorius公司)；微量振荡器(IKA公 司)；LS-55荧光光谱仪(美国PerkinElmer公司)。应用r=(， 一G ·，)／(， +2G·， )，， ，， 分别 为激发偏振器垂直方向时，发射偏振器在垂直方 向和水平方向的荧光强度。G为仪器校正因子 。 2．3 实验方法 如图1，将60 L10mmol／LNaC103、6 L0．1mmol／LFCLA、一定标准浓度的HSA或者样品溶液 2007-06-04收稿；2007-08-27接受 本文系国家 自然科学基金(No30627003、广东省 自然科学基金(No．015012)资助项 目 E—mail：xingda@ scnu．edu．on