丹酚酸B盐对肝细胞毒性与凋亡的影响.pdfVIP

ECM的过度沉积，起到抗纤维化作用。兰豆护肝颗粒对肝损伤时胶原生成具有抑制作用，同时对已生成的 胶原具有促进降解的作用，因而，可以认为兰豆护肝颗粒具有防治肝纤维化的作用。由于中药复方作用机 制复杂，因此，本实验研究仅部分地揭示了该方的抗肝纤维化的作用，该方通过何种途径影响Smad4的表 达而达到抗肝纤维化作用，尚需实验进一步深入研究。 丹酚酸B盐对肝细胞毒性与凋亡的影响 闰秀川 许丽丽 陶艳艳，王清兰 刘成海 上海中医药大学附属曙光医院上海市中医药研究院肝病研究所(201203) 丹酚酸B盐是活血化瘀中药丹参的主要水溶性成分之一，临床和实验研究n，21表明，丹酚酸B盐具有较 好的抗肝纤维化与肝损伤作用。近年研究发现，肝细胞凋亡与肝损伤及其肝纤维化关系密切，本文采用 HepG2肝细胞株、以药物高内涵筛选分析等方法、评价丹酚酸B盐对肝细胞的毒性及其凋亡作用。 。‘ ” ‘‘ 1．材料与方法‘ 1．1细胞株HepG2细胞株，由芬兰Kuopio大学E卜NezamiHani教授馈赠。 1-2药物、试剂及仪器 主要药物与试剂：丹酚酸B盐，相对分子质量742，由中国科学院上海药物所提取与鉴定，纯度80％。 Blood＆Tissue 司产品。胎牛血清购自奥地利P从公司。Dneasy V／PI 试剂盒，购白BD公司。其他试剂均为分析纯。 ScanHCS 1主要仪器：Kinetic Reader，购自ThermoFisher公司。流式细胞分析仪，BD公司产品。 复目FR一100图像分析系统，上海复日科技有限公司产品。 D预致敏细 1．3模型制备及分组以ActDlOOng／ml，TNF—Q20ng／ml刺激诱导细胞凋亡模型。Act 胞30分钟后，再加入TNF-Q。 u Il M丹酚酸B盐组、10M丹酚酸B盐组和 常规培养生长良好的HepG2细胞，分为正常组、模型组、1 ’ 卜乙酰半胱氨酸组。37。C温浴的药物于诱导模型前l小时加入。 p 1．4细胞增殖与活力测定：alarmarBlue州法。96孔细胞培养板，每孔加90L细胞悬液(含0．5％FBS)， 调整每孔约5X103个细胞，细胞生长过夜，每孔加10pL 吸光度值。根据以下公式计算alamarBlue还原值。 l试剂盒操作步骤， 1．5细胞毒性分析：药物高内涵筛选分析法，按照MultiparameterCytotoxicity u 调整细胞密度8×104／ml，96孔细胞培养板，每孔加100 培养箱培养24h。加不同浓度的丹酚酸B盐作用24h，每组设3个复孔。每孔直接加温浴的1XMPCTI每孔 u X洗涤缓 50Ⅱl，370c孵育30min。吸弃培养基，每孔加100l预温的固定液，室温通风柜放置15min。1 冲液100ul／孔洗两次。加2001111X洗涤缓冲液。封板，高内涵筛选分析系统检测。 ·326· Multiparamete