Rh-SAA对3T3-L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响.pdfVIP

实用医学杂志2010年第26卷第22期 4063 Rh—SAA对 3T3一L1脂肪细胞胰岛素敏感性的影响 叶夏云 罗晓红 程晓文 李静 杜生明 戴永利 摘要 目的：通过检测不同浓度和不同时间点Rh．SAA干预的3T3一LI脂肪细胞对葡萄糖的转运情况， 了解 Rh．SAA对脂肪细胞胰岛素敏感性 的影响。方法：采用不同浓度的Rh—SAA(1、10、20I,zg／mL)干预 3T3一LI脂肪细胞 48h及 20p~g／mLRh．SAA分别干预细胞 6、12、24、48h，采用 H一2一DG摄入法检测细胞对 葡萄糖的转运率。结果：Rh—SAA显著减少3T3．L1脂肪细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取，呈剂量和时间依 赖效应。结论：Rh．SAA能降低 3T3．L1脂肪细胞对胰岛素的敏感性，提示炎症与胰岛素抵抗密切相关。 关键词 胰岛素抗体 ；Rh．SAA； 胰岛素抵抗； 3T3．L1脂肪细胞 肥胖主要 的病理生理改变是脂肪细胞数 目 能公司。 增多、增大以及脂肪组织 内大量 巨噬细胞浸润 ，肥 1．2 细胞培养及诱导分化 3一Ll前脂肪细胞接 胖患者的病态脂肪组织分泌大量炎性因子参与胰 种于培养板，用含 10％胎牛血清的高糖 DMEM培 岛素抵抗[1]。既往仅仅把血清淀粉样蛋白A(serum 养液在37C、5％的CO条件下培养，待细胞融合 2 amyloidA，SAA)看作是一个炎症标志物，并认为肝 d后 ，加含 0．5mmol／LIBMX、0．25p~mol／L地塞米 脏组织是血清 SAA的主要来源 。然而 ，近年 松 、1~g／mL胰 岛素和 10％小牛血清 的高糖 SjoholmEz]和 PoitouEs]报道 ．在非急性炎症反应状态 DMEM培养48h。换以含 1p~g／mL胰岛素的培养 下，脂肪组织是产生急性血清淀粉样蛋白A’的主 液再培养48h，随后以 10％胎牛血清高糖 DMEM 要部位。我们前期研究显示 ，对胰岛素敏感的 继续培养 ，2d换培养液 1次 ，诱导分化 8—10d =IT3．L1脂肪细胞只有极少量的SAA表达 ，而一旦 的31’3一L1细胞 90％以上呈脂肪细胞表型 ．可用于 3．Ll脂肪细胞出现胰岛素抵抗SAA表达则显著 实验。 增加[。这些研究提示，A．SAA是一个脂肪源性炎 1．3 细胞处理、将分化成熟的3T3．Ll脂肪细胞 症因子，它与肥胖 、胰岛素抵抗和2型糖尿病有着 换用含 0．2％BSA的无血清 DMEM培养液培养 密切的关系。基于以上研究结论 ，我们提出如下假 12h使细胞同步化 ，后换用不含 (对照组)或含 设．这个由病态脂肪组织分泌的炎症因子 SAA可 Rh．SAA (1、10、20~g／mL)培养液培养 48h及 能会通过 自分泌作用引起脂肪组织胰岛素抵抗 ， Rh．SAA(20Ixg／mL)于预 6、12、24、48h，各组细胞 通过内分泌作用引起全身胰岛素抵抗。为了验证 处理完毕，再分别检测 H．2一DG摄取率。同时设 这个假设．我们将 3T3．L1脂肪细胞暴露在重组人 立 Washout试验组 ．即用 20~g／mLRh．SAA干预 血清淀粉样蛋 白A(Rh．SAA)中培养 ，通过检测其 3T3一u 脂肪细胞 48h后 ，移去含 Rh—SAA的培养 对葡萄糖转运能力的变化了解 SAA对脂肪细胞胰 液 ．换入全培养液再培养 12h时后检测其对 岛素敏感性的影响。 H．2．DG的摄取率。各组设立 3复孔。 1 材料与方法 1．4 葡萄糖转运的测定 将 以上各组细胞移去 1．1 主要试剂 3rr3．Ll前脂肪细胞株来 自中国 培养液 ，以KRP