副结核分枝杆菌MAP1588C蛋白的原核表达与抗原性分析.pdfVIP

中国动物传染病学报 2012，20(6)：36—39 ChineseJoumalofAnimalInfectiousDiseases · 研究论文 · 副结核分枝杆菌MAP1588C蛋白的原核表达 与抗原性分析 刘银冰 1,2，陈利苹 ，鄢秋龙 ，曹俊2 刘思国2 (黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 163319；2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室，哈尔滨 150001) 摘 要：从副结核分支杆菌K．10菌株基因组中扩增出516bp的MAP1588C基因片段 ，插入原核表达栽体pET-28b(+)，转化 至大肠杆菌BL21(DE3)，在0．5mmolL／的IPTG诱导下进行表达；利用融合蛋白的组氨酸标签进行亲和层析纯化重组蛋白； 通过抗6His标签抗体的Westernblot验证 了纯化蛋白产物；另外，副结核阳性牛血清可检测到该蛋白条带。结果表明，表达的 重组蛋白MAP1588C的蛋白分子量为21kDa，具有 良好抗原性 ，有望将此抗原用于建立副结核的ELISA诊断方法 ． 关键词：副结核分支杆菌；MAP1588C蛋白；重组表达；免疫性 中图分类号：$852．618 文献标志码：A 文章编号：1674．6422(2012)06—0036—04 PRoKARYoTICEXPRESSIONANDANTIGENICITYANALYSISOF M P1588COFM YCoBACTERIUM PARATUBERCULoSIS LIUYin—bing ，CHENLi—ping，YANQiu—long ，CAOJun，LIUSi—guo 《1．CollegeofAnimalScienceVeterinaryMedicine．Hei~ngfiangBayiAgriculturalUniversity,Daqing163319,China,2N．ationalKey LaboratoryofVeterinaryBiotechnology／DivisionofAnimalBacterialDiseases，HarbinVeterinaryReseamhInstitute,ChineseAcademyof AgriculturalSciences，Harbin150001，China) Abstract：ThegeneofMAP1588CwasclonedfromMycobacteriumparatuberculosis(MAP)strainK一10andinsertedintopET-28b(+) vector．Theresultingrecombinantplasmidp28B—MAP8wastransformedintoE．coliBL21(DE3)．Then，theproductexpressedwas purifiedusingNi affinitychromatography．ThepurifiedMAP1588Cwasapproximately21kDaandreactedwithanti一6Hisantibodyand MAPcattleantiserum inWesternblotting．TheseresultsindicatedthattherecombinantMAP1588C maintainedgoodreactivityandcould beusedfordevelopmentofanELISAmethodofrdiagnosisofMAP． Keywords：Mycobacteriumparatuberculosis；MAPI588Cprotein；prokaryoticexpression 副结核分枝杆菌 (鸟分枝杆菌副结核亚种) 恩氏病 )的患者体内分离到类似病原。尽管 目前尚 M(ycobacteriumparatuberculosis，MAP)是约内氏病 缺乏确凿证据证明克罗恩氏病是MAP引起的，但关 的病原体，能够引起反刍兽的慢性肥厚性肠炎及慢 于克罗恩氏病与该病