小麦脱水素基因wzy2表达量实时荧光定量PCR方法的建立和应用.pdfVIP

西北植物学报 ，2011，31(5)：1045—1049 ActaBot．Borea1．-Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2011)05-1045—05 小麦脱水素基因wzy2表达量实时荧光定量 PCR方法的建立和应用 赵 鑫，张林生 (西北农林科技大学 生命科学学院旱区作物逆境生物学国家重点实验室，陕西杨陵712100) 摘 要：以 陕‘合 6号’小麦品种为材料 ，用 SYBRGreenⅡ染料，参照小麦脱水素wzy2和 fl-actin基因序列设计引 物，建立小麦wzy2基因的实时荧光定量PCR分析方法。结果表明：通过对标准品标准 曲线和熔解 曲线分析，其标 准曲线的Ct值检测范围为 12~30，PCR扩增效率高达 111．3 ；不同的标准品扩增曲线的间距为 3．078，接近于理 想值 3．32，且可显示产物特异的单峰 ，引物的特异性扩增强。小麦脱水素基因wzy2表达量实时荧光定量PCR的 测定结果表明，小麦脱水素基因wzy2在胁迫 24h的表达量明显高于胁迫 12h的表达量。 关键词：脱水素；内参照基因；实时荧光定量PeR；标准 曲线 中图分类号 ：Q789 文献标志码 ：A EstablishmentandApplicationofReal—TimeQuantitativePCR toDetecttheExpressionofW heatDehydrinGenewzy2 ZHAO Xin，ZHANG Lin—sheng (CollegeofLifeSciences，StateKeyLaboratoryofCropStressBiology inAridAreas，NorthwestA8LFUniversity，Yangling， Shaanxi712100，China) Abstract：Inodertoestablishthereal-timequantitativePCR，weusedtheprimersdesignedaccordingtothe sequenceofwheatdehydringenewzy2and~actin，todetecttheexpressionofwzy2inwheatvariety S‘hanhe6’usingSYBRGreenII．TheresultsshowedthattheCtvaluesrangedfrom 12to30，theamplifi— cationefficiencyofPCR was111．3 ，which indicatedthatthemethodwaspracticable．Thedistancebe— tweenamplificationcurvesofdifferentstandardsampleswas3．078．Theproductsdemonstratedthatprim— erswerespecifichavingonlyonepeak．Thenwedetectedtheexpressionlevelsofwheatgenewzy2byreal— timequantitativePCR．Andtheresultsshowedtheexpressionlevelofwzy2at24hdroughtstresswassig— nificantlyhigherthanthatat12hdroughtstress． Keywords：dehydin；referencegene；real—timequantitativePCR；standardcurve 逆境胁迫能够引起植物代谢变化和低分子量化 hydrin)为第二家族 ，其分子质量在 9～200kD之 合物 的积累，诱导许多相关基因表达，胚胎发育后期 间_l】]，含有 K、S和 片段 ，K片段为一段富含赖氨 丰富蛋 白(Lateembryogenesisabundantproteins， 酸的 l5个氨基酸 (EKKGIMDKIKEKLPG)残基 的 LEA蛋 白)是其中一类，LEA蛋 白的特征主要 由偏