黑胫病菌诱导的烟草SSH文库构建及其分析.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2011，37(10)：1763-1770 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN 0496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DoI：10．3724／SP．J．1006．2011．01763 黑胫病菌诱导的烟草 SSH文库构建及其分析 苏振刚 杨爱国 孙玉合 罗成刚 刘贯山 周 佳2 李元元 杨 帆 赵百英 王元英 ， -中国农业科学院烟草研究所 ，烟草遗传改 良与生物技术重点开放实验室，山东青岛 266101； 云南瑞升烟草技术(集团)有限公司 云南 昆明 650106 摘 要：黑胫病是危害严重的世界性烟草主要病害之一，探究烟草对黑胫病 的抗病机制，可以为该病 的综合防治提 供理论依据。本研究 以烟草黑胫病抗性品种革新 3号为材料，利用黑胫病0号生理小种诱导其水平抗性，分别在接种 后 0．5、1、3、6、10和 16d取样，通过抑制差减杂交技术(SSH)构建 cDNA文库，获得了960个阳性克隆。利用反 向Northern斑点杂交技术对其中240个阳性克隆进行杂交筛选，筛选出57个表达差异明显的基因，序列拼接后获得 33条高质量 EST，测序及其比对分析表明，革新 3号对烟草黑胫病抗性相关基因主要涉及抗病防卫、光合作用、信 号传导和能量代谢等方面。进一步基因功能分析显示，病程相关 PRlb蛋 白、半胱氨酸蛋 白、延伸因子 1-a、d一微管 蛋 白、细胞色素P450、精胺合成酶、水通道蛋白、过氧化物酶体膜蛋白、甘氨酸延伸 因子等可能参与了烟草与黑胫 病菌非亲和互作过程。 关键词：烟草；黑胫病病菌；抑制差减杂交；反向Northern斑点杂交 ；非亲和互作 ConstructionandAnalysisofTobaccoSSH LibraryInducedbyP tophthora parasiticavar．nicotianae SU Zhen—Gang ，YANG Ai—Guo ，SUN Yu—He，LUO Cheng—Gang ，LIU Guan．Shan，ZHOU Jia， LIYuan—Yuan ，YANG Fan ，ZHAOBai—YinglandW ANG Yuan—Ying’ ， TobaccoResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculutralSciences／KeyLaboratoryofTobaccoGeneticImprovementandBiotechnology Qingdao266101，China；YunnanReacendTobaccoTechnology(Group)Co．Ltd，Kunming650106，China Abstract：Blackshankoftobaccoisoneofthemajordiseasewhichharmfultotobaccoinhteworld，theincompatibleinteraction betweentobaccoandP vtophthoraparasiticavar．nicotianaewasstudiedtoprovidemoreinformationforintegratedcontro1．A cDNA—SSH librarywasestablishedbysuppressionsubtractivehybridizationusingrootsandstemssampledat0．5，l，3，6，10，nad 16dafterinoculationofGexin3．ahorizontalresistantcultivartorace0ofP vtophthoraparasiticavaE nicotianae，nad960 positivecloneswerepickedout．Amongthem ．240positivecloneswerevefifiedbyReverseNortherndot—blot．A totalof57dif_ ferentiallyexpr