陈皮多甲氧基黄酮类成分诱导荷H22肝癌小鼠肿瘤细胞凋亡作用的研究.pdfVIP

． 1596． 呻毒材 JournalofChineseMedicinalMaterials 第32卷第10期2009年10月 陈皮多甲氧基黄酮类成分诱导荷 H22肝癌 小鼠肿瘤细胞凋亡作用的研究 李兰英，彭蕴汝，钱士辉 (江苏省中医药研究院，江苏 南京210028) 摘要 目的：研究陈皮多甲氧基黄酮类成分(CM)对荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡影响。方法：采用流式细胞术 (flow cytometry，FCM)测定CM对荷 H 肝癌小鼠肿瘤细胞的作用；采用琼脂糖凝胶 电泳 (agarosegeleletrophoresis，AGE) 检测荷H：肝癌小鼠肿瘤细胞的DNA片段化。结果：CM5．0、10．0m kg能诱导荷 H 肝癌小鼠肿瘤细胞凋亡；琼 脂糖凝胶电泳可见典型的DNA凋亡条带。结论：CM可以诱导荷H 肝癌小鼠肿瘤细胞的凋亡。 关键词 陈皮多甲氧基黄酮类成分；荷瘤小鼠；细胞凋亡 中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：100l-44542《009)10—1596—03 陈皮在临床上常用于理气健脾，燥湿化痰 ，是芸 1．4 主要仪器 流式细胞仪 (Facsailiber)，美 国 香科植物柑橘 (CitrusreticulataBlanco)及其栽培变 BD公司，细胞周期采用ModfitLT2．0software(Veli— 种的干燥成熟果皮。近年来陈皮的主要有效成 tySoftwareHouse)进行分析；JD．801凝胶 电泳分析 分——多甲氧基黄酮类成分的抗肿瘤作用受到了国 仪。 内外学者的普遍关注 ¨。。在前期的体外实验中发 2 方法 现它可以诱导人肝癌 SMMC一7721、HepG2细胞株凋 2．1 荷瘤小鼠的制备 无菌操作下抽取已接种肝 亡 j。为了对其进一步开发利用，笔者对其在荷瘤 细胞癌 H，，瘤株8d的荷瘤小 鼠的腹腔瘤液，以无菌 小鼠肿瘤细胞 中的作用进行探讨。 生理盐水稀释至瘤细胞浓度为 5X10／mL，于小 鼠 1 材料与仪器 右前肢腋部皮下接种 ，0．2mL／只。 1．1 实验动物 清洁级昆明小 鼠，体质量(18-4-2) 2．2 动物分组及处理 昆明小鼠，雌雄各半，随机 g，雌雄各半，购于上海斯莱克实验动物有限责任公 分为模型组、阳性对照组 (5一Fu25mg／kg)及 CM低 司，合格证号：SCXK(沪)2002-0010。饲养环境为清 (2．5mg／kg)、中(5．0mg／kg)、高 (10．0mg／kg)剂 洁级，合格证号：SYXK(苏)2002-0007。 量组。各组于接种肿瘤次Et开始按以上剂量灌胃给 1．2 肿瘤细胞株 小鼠肝细胞癌 H 实体型，购 自 药，1次／d，连续 12d，荷瘤空 白组给予等容积生理 江苏省肿瘤研究所，由江苏省中医药研究院药理室 盐水。 传代保种。 2．3 荷瘤小鼠肿瘤细胞周期测定 将新鲜肿瘤 1．3 药物与试剂 陈皮多甲氧基黄酮类成分 组织剪碎，反复挤压，然后用 200目尼龙网过滤， (CM)：由本院药物化学室提供，用二甲基亚砜(DM— PBS冲洗 ，制成单细胞悬液。1500r／min离心 l0 SO)助溶，PBS溶解后，一20℃冰箱保存备用；碘化 min，弃上清，沉淀置于 70％冷 乙醇中静止固定45 丙啶(PI)、RNA酶、蛋 白酶 K：Sigma公司进 口分装 ； rain。加入碘化丙啶 (PI)染色，室温避光放置 30 琼脂糖 ：上海化学试剂公司，分析纯 ；细胞裂解液 ： rain。用流式细胞仪检测凋亡细胞并分析细胞周期 Tris—HC110mmol／L，pH =7．4；EDTA 10 mmol／L，pH 分布。