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第六章 食品中污染物、有害残留物含量的检测 实验一 食用油中黄曲霉毒素 B1 的测定 一、目的要求 学习薄层层析法分离检测食用油黄曲霉毒素的实验方法，了解做好本实验的操作要点。 二、实验原理 样品中黄曲霉毒素 B1 经提取、浓缩、薄层分离后，在波长 365mm 紫外光下产生蓝紫色 荧光，根据其在薄层上显示的荧光的最低检出量来测定含量。 三、仪器和试剂 （一）试剂 1 、三氯甲烷。 2 、甲醇。 3、苯。 4 、乙腈。 5、硅胶 G ：薄层色谱用。 6、无水硫酸钠。 7、苯乙腈混合液：量取 98mL 苯，加 2mL 乙腈，混匀。 8、甲醇水溶液：55mL 甲醇，加45mL 水，混匀。 9、黄曲霉毒素B1 标准溶液。 （1）仪器校正：测定重铬酸钾溶液的摩尔消光系数，以求出使用仪器的校正因素。准 确称取 25mg 经干燥的重铬酸钾 （基准级），用硫酸 （0.5+1000 ）溶解后并准确稀释至 200mL ， 相当于[c(K Cr O )=0.0004mol/L] 。再吸取 25mL 此稀释液于 50mL 容量瓶中，加硫酸 2 2 7 （0.5+1000 ）稀释至刻度，相当于 0.0002mol/L 溶液。再吸取 25mL 此稀释液于 50mL 溶量 瓶中，加硫酸(0.5+1000)稀释至刻度，相当于 0.0001mol/L 溶液。用 1cm 石英杯在最大吸收 峰的波长(接近 350nm 处)用硫酸(0.5+1000)作空白，测得以上三种不同浓度的摩尔溶液的吸 光度，并按式(1)计算出以上三种浓度的摩尔消光系数的平均值。 A E1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - (1) c 式中 E ——重铬酸钾溶液的摩尔消光系数； 1 A——测得重铬酸钾溶液的吸光度； c——重铬酸钾溶液的摩尔浓度。 再以此平均值与重铬酸钾的摩尔消光系数值 3160 比较，即求出使用仪器的校正因素， 按式（2 ）进行计算。 3160 f - - - - - - - - - - - - - - - - - - - (2) E 式中 f ——使用仪器的校正因素； E——测得的重铬酸钾摩尔消光系数平均值。 若f 大于 0.95 或小于 1.05，则所用仪器校正因素可略去不计。 （2 ）黄曲霉毒素B1 标准溶液的制备：准确称取 1~1.2 mg 黄曲霉毒素 B1 标准品，先加 入2mL 乙腈溶解后，再用苯稀释至 100mL，避光,置于4 ℃冰箱保存。该标准液约为 10 μg/mL 。 用紫外分光光度计测标准溶液的最大吸收峰的波长及该波长的吸光度值。 结果计算：黄曲霉毒素 B1 标准溶液的浓度计算按下式： A ×M ×1000×f X E 2 式中 X——黄曲霉毒素 B1 标准溶液的的浓度（µg/mL ）； A——测定的吸光值； f ——所使用仪器的校正因素； M——黄曲霉毒素 B1 的分子量 312 ； E2——黄曲霉毒素 B1 在苯– 乙腈混合液中的摩尔消光系数 19800。 根据计算，用苯―乙腈混合液调到标准溶液浓度恰为 10.0 μg/mL ，并用分光光度计核 对其浓度。 （3 ）黄曲霉毒素样纯度测定：取 10 μL/mL 黄曲霉毒素标准溶液 5 μL ，滴加于涂层厚 度 0.25mm 的硅胶 G 薄层板上，用甲醇–三氯甲烷（4+96 ）与丙酮–三氯甲烷（8+92）展开 剂展开，