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高效亲和色谱研究含有特定结构域肽与DNA的结合 张若蘅* 杨 栩 李崇熙 徐筱杰 北（京大学化学系 北京 100871） 由本实验室固相法合成并通过纯度鉴定[]。 1 前言 2.4色谱测试条件 在脱氧核糖核酸 D（NA结合蛋白质中，除了螺 流动相A:10mmol/LTris-HCl(pH8.0),B: 旋-转折-螺旋、锌指和亮氨酸拉链三种主要结构域 2.0mol/LNaCl＋10mmol/LTris-HCl(pH8.0); 之外[]，近年来，一类含有β转折结构的S(T)PXX 流速1.0mL/min;检测波长214nm,1.000AUFS。 结构域引起了人们的注意[]。这类新型结构域的肽 3 结果与讨论 片段主要是与DNA小沟结合，它们在DNA结合特 性方面与某些具有抑菌抗肿瘤活性的药物分子如纺 在DNA纤维素制备方法中，Gilham用碳化二 锤菌素(Netropsin)、Hoechst33258等有相似之处。我 亚胺试剂把聚核苷酸连接到纤维素上[6，Alberts等 们在童坦君等人改进方法[3]基础上，自制了小牛胸 把DNA吸附到纤维素上[7，Litman用紫外线照射 腺DNA纤维素，应用亲和色谱研究了含有 法使DNA与纤维素连接[89]。我们用改进的紫外线 SPXXXGXP结构域肽与DNA结合的作用。与低压 照射法制备小牛胸腺DNA纤维素，收率较高 亲和色谱相比，高效亲和色谱 HPAC）具有高精度、 (75%)。经试验，其稳定性能达到高效亲和色谱 微量、快速和重复性好等优点，是研究蛋白质 多（肽） (HPAC)的要求。 与DNA结合作用的有效方法。 以S2肽为例，亲和色谱结果 （图1表明，S2肽能 够与纤维素载体上的小牛胸腺DNA结合，用 2 实验部分 10mmol/LTris-HCl(pH8.0)缓冲液长时间洗脱， 2.1材料与方法 这种结合作用是稳定的；但随着洗脱液中NaCl浓 微晶纤维素 柱（色谱用），上海试剂二厂；小牛胸 度的线性增加，S2肽被一定浓度的NaCl溶液 0（.37 腺DNA(＞95％)，中科院东方仪器设备公司；二苯 mol/L）从DNA纤维素柱上洗脱下来。其它四个肽 胺 重（结晶，m.p.52.5～?53.5℃妫 ，北京化工厂。820 的实验结果类似，先后被不同浓度的NaCl溶液从 工作站HPLC:Waters510泵，Waters490E紫外检测 DNA纤维素柱上洗脱下来，P1:0.48mol/L,P2: 器。 0.49mol/L,P3:0.47mol/L,P4:0.44mol/L，呈现出 2.2 DNA纤维素制备 P2～玃P1～玃P3＞P4＞S2规律性 （图2。 DNA纤维素按文献方法制备[3]。二苯胺法[]测 在同一色谱条件下，纤维素柱 不（含DNA）对比 得每克DNA纤维素所含的DNA量是0.012g。筛选 实验结果排除了纤维素与五个肽物理吸附的可能 30～70目DNA纤维素填充不锈钢柱(3.9mmi.d. 性。上述高效亲和色谱结果表明，从NaCl浓度的高 ×2.0cm)。 低即可看出肽与DNA结合的稳定性程度。考察这 2.3多肽合成 五个肽的结构，我们发现，S1P2X3X4X5X6P8结构域 我们选择酵母HO基因SW15因子上的一段序