抗性及与tau蛋白结合能力的影响.pdfVIP

第 21 卷 　第 5 期 病　　毒　　学　　报 Vol. 21 　　No. 5 　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　 2 0 0 5 年 9 月 CHINESE JOURNAL OF VIROLO GY September 　2 0 0 5 N 端八肽重复区数目对人重组 PrP 与金属离子结合后的蛋白酶 抗性及与 tau 蛋白结合能力的影响 1 1 1 1 1 , 2 1 1 1 高建梅 ,万言珍 ,韩俊 ,王小凡 , 陈岚 ,聂凯 ,周伟 ,董小平 ( 1 中国疾病预防控制中心 病毒病预防控制所 ,北京 　100052 ; 2 中国医学科学院基础医学研究所 ,中国协和医科大学基础医学院 ,医学分子生物学国家重点实验室 ,北京 　100005) 摘要 :人类朊病毒病中约 10 %～15 %具有家族遗传特性 ,其中插入或缺失突变多发生于 PrP 蛋白 N 末端的八肽重 复区域。运用 PCR 成功地构建并表达了含不同八肽重复数目的 PrP 蛋白 ,并观察八肽重复数目的增加对 PrP 与 Cu2 + 等二价离子以及 tau 蛋白的相互作用的影响。实验结果显示 :各种纯化后的 PrP 蛋白对常规浓度 PK 消化是 敏感的 ,而与 Cu2 + 共同孵育可使 PrP 蛋白的 PK 抗性增强 ;八肽重复序列的数目及 Cu2 + 的浓度决定了 PK 抗性的 出现和强弱。另外 ,Mn2 + 可诱导产生与 Cu2 + 相似的结果 ,但其诱导效应似乎低于 Cu2 + ,而 Zn2 + 对 PrP 蛋白的 PK 抗性无影响。GSTtau 包被的 EL ISA 检测证实 ,重组的 PrP 呈现出明显的 tau 蛋白结合能力 ,并且与八肽重复序列 的数量相关 ,重复序列数量越多 ,结合能力越强。这些结果提示 ,Cu2 + 诱导产生的 PrP 蛋白 PK 抗性是通过八肽重 复序列区域产生的 ,并且直接与重复序列的数量相关。另外 ,PrP 蛋白八肽重复序列的存在和数量直接影响 PrP 与 tau 蛋白的结合效应。除了八肽区域外 ,PrP 蛋白其它区域似乎也具有一定的 tau 蛋白结合能力。 关键词 :重组人 PrP ;N 端八肽重复区突变 ;生化特性 ( ) 中图分类号:R373 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000 - 8721 2005 05 - 0376 - 08 　　在人类的 prion 疾病中约 10 %～15 %是与遗传 [7 ] ( ) [8 ] 素 , 神经元细胞黏附分子 N - CAM 和 ( [9 ] 有关 ,包括约 10 %的家族性克雅氏病 CreuzfeldtJa Bcl2 。但是到目前为止还没有证据表明这些相互 ) ( ) cob disease ,CJD ,所有的吉 - 曼氏综合症 GSS 和 作用与明确的生理功能有关。 ( ) 家族性致死性失眠症 FFI