《高级医学实验技术及实验室安全防护》见习指导.docVIP

高级医学实验技术和实验室安全防护 见习指导 目 录 实验(见习)课的一般要求3 见习一 实验室常用科研仪器的使用4 见习二 激光扫描共聚焦显微镜及免疫组织化学染色技术9 见习三 细胞培养技术与流式细胞术13 见习四 透射电镜技术16 主要参考书19 实验（见习）课的一般要求 一、上课须知 1．准备工作 (1) 上课前应阅读本实验中相应部分，明确实验的内容和要求。 (2) 根据实验内容阅读教材中的有关章节，弄清基本概念和方法，使实验能顺利完成。 2．要求 (1) 遵守课堂纪律，注意聆听指导教师的讲解。 (2) 实验中的具体操作应按实验讲义的规定进行，如遇问题要及时向指导教师提出。 (3) 实验中出现的仪器故障必须及时向指导教师报告，不可随意自行处理。 (4) 进入实验室要穿白大衣。 二、见习课所占课程成绩的比例及考核办法 1．每次实验（见习）都要有实验（见习）报告，并有指导教师的评分和评语。实验（见习）成绩及批改情况要详细记录，存档备查。 2．实验成绩占考核总成绩的20%。 见习一 实验室常用科研仪器的使用 一、见习目的 1．掌握离心机、双蒸水器、高压灭菌锅等常用仪器设备的使用。 2．熟悉消毒、灭菌与无菌操作、免疫印迹等基本技术的原理。 二、仪器设备 （一）常规仪器 天平，振荡器，加样器，枪头等，离心机，制冰机，冰箱，纯水系统，磁力搅拌器，磁子，恒温水浴， （二）细胞培养系统 超净台，二氧化碳培养箱，二氧化碳钢瓶，倒置显微镜系统，电动加样器，各种吸管 （三）分子生物学有关仪器 PCR仪，实时定量PCR仪，细菌培养，离心机，Western Blot系统，杂交仪，酶标仪 （四）大型仪器 流式细胞仪，激光扫描共聚焦显微镜 见习内容一 离心机的使用 一、原理：在离心力场的作用下，加速悬浮液中固体颗粒沉降（或漂浮）速度。 二、操作方法 1．接通离心机电源，打开机器开关，等待机器自检完毕。 2．按open键（机器电子锁开），打开机器盖。 3．根据使用需要选择合适的转子，将转子轻轻地套在旋转轴上，用六角螺丝刀旋转转子上的螺母，将转子固定。 4．根据转子选择适合的离心管，将样品装入一对离心管后，在托盘天平上调节使它们质量相等，然后对称的放入转子中，先将转子的盖子旋紧，然后盖上机器盖。 5．根据需要依次设置离心所需要的温度、运行程序（可不选择）、转速、离心时间（当触及某一项的按键时，显示屏上相对应的值会闪烁，设完一个参数可直接触及下一个按键，继续设定所需数值），设置结束后按“start/stop”开始运行机器。 6．离心结束后，转子会逐渐地停下来，“open”键指示灯亮起，按此键打开离心室，旋开转子盖，取出样品。 7．将离心管处理干净，倒置在小张滤纸上使其干燥，以便下次使用。旋上转子盖，关上机盖。若离心室内壁有冰霜待其化净干燥后，再旋上转子盖，关上机盖。 见习内容二 消毒、灭菌与无菌操作技术 一、仪器设备 手提式高压灭菌锅、立式高压灭菌锅、全自动高压灭菌锅、烘箱、超净工作台、无菌室、酒精灯、滤菌过滤器 二、仪器结构 灭菌器：安全阀、压力表、放气阀、软管、紧固螺栓、灭菌桶、筛架、水（各种型号的结构有些不同，但是原理是一样的）。 超净工作台：开关、风力调节器、灯开关。 烘箱：电源开关、设温旋钮。 三、原理 1．干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 2．湿热灭菌是物品放入密闭的加压灭菌锅内加热，产生蒸汽，排除冷空气后密闭，使蒸汽不溢出，增大压强，使水的沸点升高，高于100℃，导致菌体蛋白质凝固变性达到目的。 3．过滤除菌主要是选用孔径小的微孔材料制作成专门的细菌滤器，通过减压过滤，达到除菌。 4．紫外线灭菌是指在波长200nm-300nm之间，紫外线诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制达到灭菌。另外，由于辐射使空气中的氧电离成氧离子，氧离子再把氧气氧化成臭氧或使水被氧化为双氧水，臭氧和双氧水都有杀菌的作用。 四、适用范围 适用于任何无菌操作的实验。如：细胞传代培养、植物组织培养、细菌接种、微生物的分离纯化等各种高压蒸汽灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌的原理和操作技术；无菌室、超净工作台的使用和在酒精灯火焰旁接种技术。 五、操作步骤 各种高压蒸汽灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌的原理和操作技术；无菌室、超净工作台的使用和在酒精灯火焰旁接种技术。 六、注意事项 高压蒸汽灭菌开始前要把冷空气排尽，灭菌后要待压力降到“0”时才打开排气阀；烘箱灭菌要注意被灭菌物的灭菌温度；紫外线灭菌不要让紫外线照射人的皮肤；无菌室要定期用甲醛蒸汽熏蒸。 见习内容三 蛋白